[发明专利]一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒及其制备和检测方法。本发明试剂盒包括试剂R₁和试剂R₂；试剂R₁包括电解质、缓冲液、促进剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、与含有马来酰亚胺基团的有机小分子α共价偶联的生物大分子或合成高分子，试剂R₂包括电解质、缓冲液、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、与含有游离氨基的有机小分子α抗体偶联的胶乳微球。本发明通过将有机小分子α与生物大分子或合成高分子结合，利用样本中有机小分子与结合在生物大分子或合成高分子上的抗原竞争结合试剂R₂中的微球表面的抗体，形成网状结合物，使反应体系浊度下降，从而可通过测量透过悬浊液的吸光度变化测定被检测标志物的浓度，使有机小分子的检测更为方便。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂领域，特别涉及一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒及其制备和检测方法。

背景技术

目前，临床上检测维生素D等有机小分子的方法主要有化学发光法、液相色谱-质谱法、放射免疫法、酶联免疫法及克隆酶供体免疫检测法。化学发光法灵敏度高，但需要特定的化学发光仪，检测成本高；酶联免疫法费时长，成本高；质谱法用时较长且操作复杂；放射免疫法有环保问题；克隆酶供体免疫检测法的试剂稳定性差。

胶乳颗粒增强免疫比浊法是通过测量透过悬浊液的吸光度变化从而测定被检测标志物浓度的方法。与上述检测方法相比，该方法具有灵敏度高、稳定好等特点，因此，该方法被广泛用于特种蛋白、肿瘤标志物等体外诊断试剂的研发中。但由于多数有机小分子标志物只有一个抗体结合点，很难与共价偶联在微球上的抗体结合形成网状结构的聚合物，并改变反应体的吸光度。因此，胶乳颗粒增强免疫比浊法在检测维生素D等有机小分子标志物领域受到极大限制。

发明内容

本发明的主要目的在于，针对临床上维生素D等有机小分子检测灵敏度低、费时长、操作复杂、成本高等问题，提供一种用于检测维生素D等有机小分子的胶乳增强免疫比浊检测试剂盒，该试剂盒具有检测灵敏度高、检测迅速、操作简单等特点，且扩展了胶乳增强免疫比浊法在有机小分子检测试剂中的应用，具有良好的实用价值。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒，用于有机小分子的检测，包括试剂R₁和试剂R₂；所述试剂R₁包括电解质、缓冲液、促进剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、与含有马来酰亚胺基团的有机小分子α共价偶联的生物大分子或与含有游离氨基的有机小分子α共价偶联的合成高分子，所述试剂R₂包括电解质、缓冲液、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、与有机小分子α抗体偶联的胶乳微球；其中，所述生物大分子为牛血清白蛋白或明胶，所述合成高分子为含有游离氨基的聚合物或游离羧基的聚合物，且所述生物大分子和合成高分子的分子量为2～300KD，如10KD、60KD、110KD、180KD、230KD、290KD中任一数值；所述有机小分子α的分子量在2KD以下，如0.2KD、0.9KD、1.3KD、1.8KD中任一数值；所述胶乳微球直径为50～450nm，如100nm、160nm、250nm、380nm中任一数值。

优选地，所述有机小分子α为25-羟基维生素D₃、地高辛、雌二醇，三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、维生素B₁₂或叶酸。