[发明专利]一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，是由以下重量份的原料制得的：哈茨木霉菌20-30份、纳豆芽孢杆菌10-20份、枯草芽孢杆菌15-25份、异常汉逊酵母20-30份、圆褐固氮菌5-15份、多孔磁性壳聚糖微球5-10份；

所述多孔磁性壳聚糖微球是由以下步骤制得的：

1)将氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20混合均匀，密封浸泡2-4h，50-55℃水浴加热并搅拌至羧甲基壳聚糖完全溶解，且静止至气泡完全逸出，得羧甲基壳聚糖相；

2)将司班-80和液体石蜡加至烧瓶中，50-60℃水浴加热，搅拌至混合均匀，作为石蜡相；

3)50-60℃水浴加热条件下，边搅拌边将羧甲基壳聚糖相滴加到石蜡相中，滴加完毕继续搅拌5min；匀速将50-60℃的水浴换成冰水浴，5-10min后撤去冰水浴，室温条件下添加混合溶液，反应5-9h，停止搅拌，依次用石油醚、无水乙醇洗涤数次，真空干燥，得粒径为5-10μm的多孔磁性壳聚糖微球；

所述混合溶液是由正硅酸乙酯和无水乙醇按照1：10-20的重量比混合得到的。

2.根据权利要求1所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，所述氨水、纳米四氧化三铁、羧甲基壳聚糖和吐温-20的重量比为100：5-15：10-15：10-20；所述氨水的浓度为20％。

3.根据权利要求1所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，所述司班-80和液体石蜡的重量比为1：25-30。

4.根据权利要求1所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂，其特征在于，所述羧甲基壳聚糖相、石蜡相和混合溶液的重量比为1：6-8：0.4-0.6。

5.一种权利要求1-4中任一项所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，其特征在于，是由以下步骤制得的：

1)分别取斜面保种的异常汉逊酵母和圆褐固氮菌各两环，分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基，培养温度37℃，培养时间20h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液；

2)分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的种子液按5％接种量接入500L种子罐培养基中，35℃、180r/min条件下培养24h，分别得异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液；

3)分别将异常汉逊酵母和圆褐固氮菌的菌液用硅藻土吸附，吸附完成后板框压滤机压滤，喷雾干燥，进风温度140-180℃、进料流量13-17ml/min，分别得异常汉逊酵母菌剂和圆褐固氮菌菌剂；

4)将哈茨木霉菌、纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、异常汉逊酵母菌剂、圆褐固氮菌菌剂和多孔磁性壳聚糖微球混合均匀，加入气流粉碎机，细度控制300-400目，即可制得具有防控苹果树根腐病微生物菌剂。

6.根据权利要求5所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述牛肉膏蛋白胨培养基的具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15g/L，其余为水。

7.根据权利要求5所述具有防控苹果树根腐病微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述种子罐培养基的具体组成：牛肉膏0.3％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，葡萄糖0.5％。