[发明专利]一种通过利用合成双链DNA来诱导调节性T细胞的方法

说明书

本发明公开了一种双链DNA，其中一条链的碱基序列为：5’‑ctcgaggg‑3’，且第二个C碱基为甲基化的。同时，本发明还公开了所述双链DNA在诱导调节性T细胞中的应用。本发明提供的双链DNA在体外没有免疫原性、不会损伤白细胞，可以诱导FoxP3阳性的调节性T细胞，可有效用于非感染性炎症、感染后炎症性疾病，呼吸道过敏性疾病、胃肠道过敏性疾病、皮肤过敏性疾病和自身免疫疾病等免疫相关疾病的治疗。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种通过利用合成双链DNA来诱导调节性T细胞的方法。

背景技术

调节性T细胞(Regulatory cell，Treg)是一类控制体内自身免疫反应性的T细胞亚群，可分为天然产生的自然调节性T细胞(nTreg)和诱导产生的适应性调节性T细胞(iTreg)，是机体维持自身耐受的重要组成部分，由胸腺或由外周活化的细胞发展而来。其中，转录因子Foxp3是Treg的特征性标记，Foxp3作为一个转录调控因子，通过直接调控多种基因来调节Treg的活性，在Treg细胞发育过程和功能起着关键的作用。

Treg与自身免疫疾病和器官移植的免疫排斥反应等有密切的关系，研究已经证实了Treg可用于上述免疫相关疾病的治疗，通过体外扩增Treg再回输到患者体内可以改善疾病的进展。然而体内存在的Treg数量很少，仅占正常人外周血CD4⁺T细胞中的5％～10％。因此，建立一种体外大量诱导产生Treg的方法，从而获得足够数量的Treg用于免疫相关疾病的治疗，具有非常重大的临床意义。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种双链DNA，其在体外没有免疫原性、不会损伤白细胞，可以诱导调节性T细胞，具有免疫抑制功能。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种双链DNA，其中一条链的碱基序列为：5’-ctcgaggg-3’，且第二个C碱基为甲基化的。

优选地，所述双链DNA可组成分子量为10～50000MW的生物性双链DNA寡聚体，所述生物性双链DNA寡聚体命名为Metvax。

所述双链DNA在体外没有免疫原性、不会损伤白细胞；且在体外可以抑制抗原、丝裂霉素和自身抗原诱导的T细胞增生，并且这个抑制作用成剂量依赖性。

本发明的另一目的，在于提供所述双链DNA在诱导调节性T细胞中的应用。

本发明的又一目的，在于提供一种诱导调节性T细胞的方法。

本发明所述调节性T细胞是指具有CD4⁺FoxP³⁺免疫表型的调节性T细胞。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为，一种诱导调节性T细胞的方法，包括以下步骤：

(1)获得人初始CD4⁺T细胞；

(2)将步骤(1)获得的人初始CD4⁺T细胞与人抗CD3/CD28抗体、TGF-β、IL-2和所述的双链DNA进行共培养；

(3)步骤(2)中培养体系培养3天后，更新含所述双链DNA的培养液；

(4)步骤(3)中的培养体系继续培养至少5天，即获得诱导产生的调节性T细胞。

优选地，所述步骤(1)中利用磁珠分选或流式细胞术分选的方法从人外周血中获得人初始CD4⁺T细胞。

优选地，所述步骤(2)中双链DNA在培养体系中的浓度为1-100ug/mL。

本申请发明人发现，在IL-2与TGF-β的存在下，可以加强双链DNA对调节性T细胞的诱导作用。