[发明专利]抗牙鲆T细胞表面标志分子CD4-2的单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种抗牙鲆T细胞表面标志分子CD4‑2的单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞JF‑CD4‑2‑1D8，保藏号为：CCTCC NO：C201880，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为：2018年03月29日的杂交瘤细胞分泌的。所述单抗经间接酶联免疫反应实验结果显示单抗能与CD4‑2多肽发生特异性结合，免疫印迹结果显示：本发明的单克隆抗体能特异性识别25kDa的牙鲆CD4‑2重组蛋白以及分子量约为33 kDa的牙鲆天然CD4‑2蛋白，免疫间接荧光和流式细胞术表明单抗能特异性识别牙鲆淋巴细胞表面CD4‑2分子。本发明制备了抗牙鲆T细胞表面标志分子CD4‑2的单克隆抗体，为检测牙鲆CD4‑2⁺T淋巴细胞提供了重要工具，对于深入理解鱼类细胞免疫机制，研制高效、绿色鱼用疫苗具有重要的现实意义。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体及其制备方法，具体涉及一种抗牙鲆（Paralichthys olivaceus）T细胞表面标志分子CD4-2的单克隆抗体及其制备方法，其属于鱼类分子免疫学技术领域。

背景技术

CD4分子为单链跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白家族膜锚定蛋白，主要表达于成熟的T淋巴细胞表面，在单核-巨噬细胞及神经细胞上也有少量表达。CD4作为T淋巴细胞共受体可以提高TCR/抗原-MHC复合物的稳定性，对淋巴细胞的分化、凋亡起调控作用，并且可以作为IL-16的受体，调节CD4⁺ T细胞的生长及趋化性。CD4⁺ 细胞作为一类重要的T淋巴细胞参与体液免疫和细胞免疫，在抵抗病原入侵等相关免疫防御中发挥着至关重要的作用。CD4+T细胞能够识别外源性抗原肽-MHC-类分子复合物，几乎参与免疫应答的全部过程。在哺乳动物中，CD4⁺ 细胞的特性及免疫功能已研究比较透彻，为开展疾病防治，评价机体免疫状态等开创了新局面。

在鱼类中，也存在于哺乳动物类似的CD4⁺ T细胞。关于鱼类CD4分子的研究取得了长足进展，主要集中在CD4分子的基因克隆和基因表达方面。研究发现，鱼类的CD4分子主要有两种类型，即CD4-1和CD4-2分子。CD4-1分子包含4个胞外Ig区，1个跨膜区和1个较短的胞质尾巴，Ig区是其识别抗原肽段的区域。不同鱼类CD4-2分子的胞外Ig区数目存在一定差异，虹鳟和牙鲆CD4-2分子具有2个胞外Ig区，而鲶鱼CD4-2分子含有3个胞外Ig区。鱼类CD4-1和CD4-2分子与高等动物CD4分子相比较均具有保守的胞外样Ig结构域及胞内酪氨酸激酶结合位点P56^lck，而CD4-2分子具有更原始的结构，因此推测在进化过程中由CD4-2分子分化产生了CD4-1分子。由于缺乏淋巴细胞特异分子标记的检测抗体，鱼类T细胞的分群则无法明确，因而对T淋巴细胞及其亚群的功能、调控机制等方面的研究仅处于起步阶段。

牙鲆（Paralichthys olivaceus）是我国北方重要的海水养殖鱼类，然而近年来频发的养殖病害是妨碍牙鲆养殖业发展的重要因素，疫苗是防治水产病害的一种有效手段。疫苗作用的发挥依赖机体适应性免疫机制的激活，在这一过程中T细胞扮演着重要角色。因此，制备牙鲆CD4分子单克隆抗体，对于检测牙鲆CD4⁺ T淋巴细胞数量变化、评价鱼类细胞免疫应答水平以及研制高效、绿色鱼用疫苗均具有重要现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗牙鲆T细胞表面标志分子CD4-2的单克隆抗体及其制备方法，用于检测牙鲆CD4-2⁺ T细胞数量变化，为鉴定鱼类CD4⁺ T淋巴细胞提供重要的免疫学工具。

本发明根据牙鲆CD4⁺ T细胞的数量变化，从而可判断鱼体的健康状况，进而可深入研究CD4⁺ T细胞的功能特性，以及评价鱼类细胞免疫应答水平和用于研制高效、绿色鱼用疫苗。