[发明专利]猪轮状病毒VP融合蛋白重构体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了猪轮状病毒VP融合蛋白重构体及其制备方法和应用。本发明提供的融合蛋白VP8‑VP7‑TAT，包括猪轮状病毒（PRV）外衣壳结构蛋白VP4的截断片段VP8和VP7及结合在其C端的TAT蛋白转导肽碱性氨基酸富集区的11个核心氨基酸。将融合蛋白VP8‑VP7‑TAT通过腹腔注射或口服灌胃的方式免疫小鼠，可有效诱导机体产生体液免疫应答和粘膜免疫应答，具有良好的免疫原性。因此，本发明将猪轮状病毒蛋白VP8、VP7与TAT融合表达，为预防PRV感染提供了一种新的方法，也为猪轮状病毒新型口服疫苗的开发奠定了基础。

技术领域

本发明属于基因生物工程技术领域，具体涉及猪轮状病毒蛋白VP8和VP7与TAT构成的融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

猪轮状病毒是引起仔猪病毒性腹泻的重要病原之一。由猪轮状病毒感染所引起的仔猪腹泻在全世界各个养猪国家均普遍存在。据报道，在英国仔猪群的发病率已超过80％，死亡率为0-50％。我国福建省福州、南平地区10日龄到断奶前仔猪PRV感染的调查表明，感染率分别达到82.3％、91.7％(张雷,卫广森.猪轮状病毒感染研究进展[J].2005(4),42-44)，该病毒无论是单纯感染或者混合感染在猪群中均普遍存在，由此给猪养殖业造成了巨大的经济损失。

猪轮状病毒(Porcine Rotavirus，PRV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus)的成员，为无囊膜、双股RNA病毒。猪轮状病毒感染是由猪轮状病毒引起的主要以仔猪厌食、呕吐、腹泻、脱水和酸碱平衡紊乱为特征性症状的疾病。1975年Woode和Bridge首次从猪分离出轮状病毒。此后，我国兽医工作者又先后在仔猪、犊牛、羔羊等多种动物的粪便中检测并分离到了轮状病毒(程健频,李昌铭,魏锦龙.仔猪轮状病毒性腹泻的调查与防治[J].甘肃畜牧兽医,2005,35(5):28-29)。轮状病毒粒子略呈圆形，具有双层衣壳，直径为65-75nm，核心直径37-40nm，无镶膜，具有双层衣壳。PRV基因组由11个片段的双股RNA组成，总长度为18Kb，各片段的分子量不等。在复制过程中，RNAs起两个作用：①直接翻译为蛋白质；②起模板作用，合成负链RNAs，进一步合成dsRNAs。现己鉴定出11种蛋白，分别由11个基因片段编码合成。分属于PRV内衣壳蛋白、外衣壳蛋白及非结构蛋白，它们决定病毒的感染性、免疫原性，并在影响病毒结构与功能方面起重要作用。其中6种为结构蛋白(VP1，VP2，VP3，VP4，VP6，VP7)，5种为非结构蛋白(NSPl，NSP2，NS34，NS35及NS28)。这11种蛋白中，VP1，VP2，VP3，NSP2，NS34，NS28为RNA结合蛋白，它们与基因组的复制、合成和表达有关(陈淑红,王新生,师东方,等.猪轮状病毒的分离鉴定及部分特性研究中国预防兽医学报[J].2004,7:1)。