[发明专利]一种用于假肉监测的检测方法

说明书

本发明涉及食品检测领域，公开了一种用于假肉监测的检测方法，其包括以下步骤：(1)样品DNA的提取；(2)根据牛、山羊、猪、鸡的线粒体基因，应用CLUSTALW1.83软件和BLAST软件进行序列比较，用Primer Premier 5.0设计一条公用上游引物，再根据种属间的差异设计各自的特异下游引物，建立反应体系，其反应体系为：25μL由10×SYBR Green I，3.0μL DNA模板，15μL Isothermal MasterMix Iso‑001，上游引物与4条下游引物各0.5μL组成。本发明的检测方法具有简便、高效、快速的特点。

技术领域

本发明涉及食品检测领域，尤其涉及了一种用于假肉监测的检测方法。

背景技术

中国畜禽肉品的消费市场庞大，六十年来我国年人均肉类消费量增长了近13倍。随着需求的不断增大，交易市场不规范、市场管理水平低下等为不法分子的不法行为提供了可乘之机，肉类尤其是牛肉、羊肉、驴肉等高价肉品掺假利润丰厚，掺假肉主要集中在注水、注胶肉；牛、羊肉中掺杂鸭肉或猪肉；牛、羊肉与狗肉等肉类食品中掺杂植物源型蛋白；再有，肉制品中掺杂狐狸肉、貉子肉等经济动物肉等形式。

传统对肉品质的鉴别方法主要是依赖于感官判断和形态学检验。但感官判断和形态学检验的局限性较大，尤其不适用于肉类来源鉴别和加工产品的鉴别。

目前对肉类成分的鉴别方法主要包括：基于蛋白的检测方法，如免疫学方法和液相色谱方法；以及基于核酸的方法，主要包括利用PCR技术对肉源性成分鉴别的方法。由于食品前处理过程易使得蛋白变性或降解，同时对肉类食品的原材料来自何种组织或器官无法了解，而许多蛋白在不同组织不同器官中的表达情况都存在不同，因此基于蛋白的肉类检测方法存在一定的局限性。基于核酸检测的荧光定量PCR技术由于其灵敏度高，操作简易，检测过程短，因而在日常肉类成分鉴别中有着普遍的应用，常用的荧光定量PCR法包括TaqMan^TM和SYBR Green两种。TaqMan^TM方法由于需要合成荧光标记的特异性引物，对不同的肉类成分需要合成不同的特异性探针，导致检测成本高。而SYBR Green方法则是将荧光染料加在反应体系中，无需合成荧光标记的特异性探针，因而更加简便且检测成本较低。在利用核酸对肉类成分检测的方法中，由于一些深加工肉制品，DNA损失的程度在90％以上，同时由于不同食品的配料和生产方式不同，因此有可能存在抑制PCR的成分，容易导致对肉类成分鉴定的PCR反应不成功，从而出现假阴性样品的结果。因此，畜肉及深加工肉制品掺假亟待需开发一种简便、高效、快速的检测方法。

发明内容

本发明针对现有技术中样品预处理繁杂、检测成本较高和易出现假阳性等缺点，提供了一种简便、高效、快速的用于假肉监测的检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

一种用于假肉监测的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，样品DNA提取

50mg肉组织用液氮研磨成粉，加入1mL细胞裂解液；样品在55℃恒温过夜；溶解产物转移至离心管，加入1mL的Tris饱和酚和1mL的8-羟基喹啉，混匀轻摇10min后进行第一次离心后取第一水相，用1/2第一水相体积的Tris饱和酚萃取后进行第二次离心后取第二水相，加入1/2第二水相体积的氯仿，混匀30s后进行第三次离心取第三水相；将第三水相转移至另一离心管，用均为1/20第三水相体积、浓度为3mol/L的醋酸钠和无水乙醇沉淀后进行第四次离心，弃上清，得到的沉淀物用70％的乙醇清洗，干燥后溶于100μL TE缓冲液中得到DNA提取物，该提取物即为DNA模板，用超微量核酸蛋白分析仪测定模板DNA的质量和浓度；