[发明专利]一种采用EMS诱变剂创制冬瓜耐涝突变体的方法

说明书

本发明提供一种采用EMS诱变剂创制冬瓜耐涝突变体的方法，该方法包括以下步骤：(1)采用体积比1‑1.3％EMS磷酸缓冲液对冬瓜种子处理10‑15h获得M₁代种子；(2)将用EMS诱变剂处理过的M₁代冬瓜种子置于氧气浓度为10‑15％的25‑30℃的CO₂恒温催芽箱中催芽；(3)M₁代种子播种，自交后获得M₂代种子；然后M₂代种子播种，自交授粉15‑25d后，采用大田过茎基部淹水15‑25cm处理3h‑4h，挑选耐涝冬瓜株系，将耐涝株系进行单瓜收种留种，获得耐涝冬瓜突变体株系Mut。本发明采用化学诱变剂EMS对冬瓜种子进行诱变处理，获得冬瓜耐涝突变体，扩大了种质资源来源，创制出新的种质资源。

技术领域

本发明涉及冬瓜种质资源创制技术领域，特别地，涉及一种采用EMS诱变剂创制冬瓜耐涝突变体的方法。

背景技术

冬瓜是我国主要蔬菜作物，年播种面积约480万亩，冬瓜产品对于调节我国蔬菜周年 供应发挥着重要作用。由于冬瓜主要分布在我国、印度、越南、老挝等东南亚国家，然而，相对于其他蔬菜作物，冬瓜材料遗传背景较窄，严重的限制了冬瓜新材料的创制和优质资源的扩大选育。目前，冬瓜缺少耐涝种质资源，而冬瓜主要种植区域在长江流域及以南地区，在种植过程中经常遭遇洪涝灾害，造成巨大的经济损失，而目前通过现有的种质资源大田筛选很难获得抗涝冬瓜种质资源，冬瓜生产中遇到的洪涝灾害问题未能很好解决。

化学诱变剂EMS(ethyl methane sulfonate甲基磺酸乙酯)是一种单功能烷化剂，是植 物诱变中最常用的高效化学诱变剂之一，由于其在体内可以转变成缺电子的活泼中间产 物，容易与碱基上的N原子和磷酸基团发生亲核取代反应，使DNA结构改变，因此被广泛用作优质作物新材料创制的化学诱变剂。EMS化学诱变技术已经在甜瓜、小麦、水稻、 玉米、西瓜、黄瓜等多种作物上取得理想的诱变效果，获得了一些基因型改变的作物，对 作物功能基因组学研究和新品种创制及扩大选育起着重要的推动作用。

创建突变体库筛选突变体可以为冬瓜育种提供新的种质材料，从而推进冬瓜种质创 新，但目前还未见冬瓜相关的突变体库构建工作，因此开展冬瓜EMS突变体诱变及耐涝突变体筛选具有重要意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种采用EMS诱变剂创制冬瓜耐涝突变体的方法，以解决现有 技术中冬瓜缺少耐涝种质资源的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种采用EMS诱变剂创制冬瓜耐涝突变体的方法，包括以下步骤：

(1)采用EMS诱变剂对冬瓜种子进行处理，具体为：挑选健康饱满的冬瓜种子，用清水冲洗冬瓜种子后，将其放置于50-60℃的温汤中浸种25-40min；浸种后置于25-30℃恒温箱催芽30-40h；然后用体积比1-1.3％EMS磷酸缓冲液处理10-15h，用终止液终止反应；浸泡结束后，用清水冲洗10-15h；

(2)种植处理的种子：将EMS诱变剂处理过的冬瓜种子置于氧气体积浓度为10-15％ 的25-30℃的CO₂恒温催芽箱中催芽，挑选发芽的种子进行育苗床播种；

(3)突变体获得，具体为：

首先，M₁代的种植和种子采收：将经过诱变处理的种子标为M₁，筛选催芽后穴盘育苗，自交授粉；将M₁代各个单株分别收获，单瓜留种，获得M₂代种子；

其次，M₂代的种植和选择：将M₂代种子在氧气体积浓度为10-15％的25-30℃CO₂恒温催芽箱中催芽，挑选萌发种子播种于试验田中；