[发明专利]铁染色试剂

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种铁染色试剂。所述铁染色试剂包括沙黄染色液、固定剂、亚铁氰化钾溶液、盐酸溶液。所述沙黄染色液含有沙黄、缓冲液和醇。本发明沙黄染色液采用缓冲液配制，可使骨髓铁染色细胞结构清晰，易于将幼红细胞、单核细胞和粒细胞区分开来大大缩短内铁的观察时间；特别是还可使核浆对比度更清晰，更易于观察细胞内铁。另外，当所述固定剂中含有戊二醛时，染色效果更好，更利于使核浆对比度更清晰，更易于观察细胞内铁。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种铁染色试剂。

背景技术

铁染色是骨髓细胞形态学检查常用的细胞化学染色方法之一。它对于诊断和鉴别缺铁性贫血、非缺铁性贫血(如营养性巨幼红细胞贫血、再生障碍性贫血、难治性贫血等)和铁粒幼红细胞贫血有重要的价值。普鲁士蓝染色是一种普遍使用的显示铁的染色方法，其检测原理是骨髓中的细胞内外铁在酸性环境下与亚铁氰化钾作用，可形成普鲁士蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁部位，蓝色沉淀颗粒的多少和深浅与细胞内外铁的含量成正比。

现有技术在进行骨髓细胞铁染色时大多出现细胞类型不易区分，细胞结构不清晰，严重影响细胞内铁的对察。

中国专利公开号CN105136549A公开了一种含核固红复染液的铁染色试剂盒及其染色方法，所述铁染色试剂盒中核固红复染液包含去污剂TritonX-100。该发明调整了核固红复染液的成分组成，加入了去污剂TritonX-100，使其在进行骨髓细胞铁染色时相比常规核固红复染液更易于区分细胞类型，细胞结构清晰，对察细胞内铁的判定更准确，同时在本发明染色方法中，采用微波方式替代常规的水浴方式，使得整体的染色时间大幅缩短。

发明内容

本发明目的是提供一种铁染色试剂，可使骨髓铁染色细胞结构清晰，细胞类型易区分，从而更易于观察细胞内铁。

本发明采用如下技术方案：

一种沙黄染色液，含有沙黄和缓冲液。

进一步地，所述缓冲液选自Tris缓冲液、HEPES缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液等中的一种或几种；优选包括磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-醋酸钠缓冲液、柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液等中的一种或几种。

进一步地，上述沙黄染色液的pH值范围为4.5-6.5；优选为5.2-6.2；进一步优选为5.8。

作为优选，所述缓冲液为磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液；更优选地，磷酸二氢钾在沙黄染色液中的浓度为14.46g/L，磷酸氢二钠在沙黄染色液中的浓度为3.72g/L。

进一步地，上述沙黄染色液中，沙黄的浓度为0.04-5g/L，优选为0.06-1g/L，更优选为0.1g/L。

进一步地，上述沙黄染色液中还可含有适量防腐剂。所述防腐剂可选自ProClin系列防腐剂(SUPELCO公司提供)、叠氮钠、苯酚、咪唑烷基脲(IZU)等中的一种或多种；其中所述ProClin系列防腐剂优选为ProClin300。

上述沙黄染色液中防腐剂的含量以0.1-5g/L为宜，可优选为1-4g/L，或可优选为1-2g/L。

上述沙黄染色液可按常规方法配制。

本发明意外地发现，当上述含有缓冲液的沙黄染色液用于骨髓细胞铁染色时，不仅可使细胞结构清晰，易于将幼红细胞、单核细胞和粒细胞区分开来；而且还可使核浆对比度更清晰，更易于观察细胞内铁。

本发明还提供一种铁染色试剂(或铁染色试剂盒)，其包括上述沙黄染色液。该铁染色试剂(或铁染色试剂盒)还包括固定剂(或固定液)、亚铁氰化钾溶液、盐酸溶液等中的一种或几种。

其中，固定剂(或称固定液)、亚铁氰化钾溶液、盐酸溶液均可按常规铁染色方法的需要进行配制。