[发明专利]热休克蛋白groEL在制备幽门螺杆菌检测的试剂中的应用

说明书

本发明涉及生物技术技术领域，尤其涉及热休克蛋白groEL在制备幽门螺杆菌检测的试剂中的应用。本发明提供了热休克蛋白groEL作为幽门螺杆菌检测标志物的应用，经实验证实，以热休克蛋白groEL作为幽门螺杆菌检测的标志物，对幽门螺杆菌毒力型的检出率大幅提高，准确率可达98％以上，且该标志物其不受非毒力型幽门螺杆菌或其他病原菌的干扰，具有良好的特异性。

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，尤其涉及热休克蛋白groEL在制备幽门螺杆菌检测的试剂中的应用。

背景技术

热休克蛋白是一种从细菌到哺乳动物中广泛存在的应激蛋白质。已有研究报导，幽门螺杆菌的热休克蛋白可能充当了胃粘膜慢性病发展和持续的启动因子。

幽门螺杆菌抗体分型是目前常用的分型方法，其对于幽门螺杆菌的毒力评价和指导临床治疗的价值得到了广泛认可，可以更加科学有效地服务于幽门螺杆菌相关疾病的精准治疗。现有的幽门螺杆菌分型方法主要是以CagA(细胞毒素)或VacA(空泡毒素)抗体存在与否判断所感染幽门螺杆菌的毒力水平，高毒力菌株往往同时表达这两种毒力蛋白，而低毒力(或者无毒力)菌株往往不表达上述毒力蛋白。但临床也发现非毒力型幽门螺杆菌感染者中也有不少发展成为幽门螺杆菌相关疾病，显示单单只以CagA或VacA作为Hp毒力型的指标是不完整的。

因此，进一步开发精准的幽门螺杆菌检测标志物是十分必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供热休克蛋白groEL在制备幽门螺杆菌检测的试剂中的应用，其能够降低毒力型幽门螺杆菌感染的漏检率。

本发明提供了热休克蛋白groEL在制备幽门螺杆菌检测的试剂中的应用。

本发明中，所述热休克蛋白groEL的氨基酸序列如SEQ ID NO:l所示。

本发明所述检测为幽门螺杆菌的分型检测。

本发明试验表明，以热休克蛋白groEL作为幽门螺杆菌检测的标志物，能够实现对幽门螺杆菌毒力型的准确检测，其不受非毒力型幽门螺杆菌或其他病原菌的干扰，具有良好的特异性，且能够降低毒力型幽门螺杆菌的漏检率。

本发明还提供了一种幽门螺杆菌检测试剂盒，其包含热休克蛋白groEL的检测试剂。

本发明所述检测试剂为包被有热休克蛋白groEL的酶标板；所述热休克蛋白groEL的氨基酸序列如SEQ ID NO:l所示。

本发明中，包被有热休克蛋白groEL的酶标板的制备方法包括：

以幽门螺杆菌NCTC 11637为模板，以SEQ ID NO:2～3所示序列的引物进行扩增，获得groEL基因片段；

将所述groEL基因片段链接入载体pTrchis2C后，获得重组质粒；

所述重组质粒经扩增后转化入大肠杆菌Rosetta，经诱导表达、纯化，获得重组groEL蛋白；

将所述重组groEL蛋白与包被液混合后包被至酶标板，然后经洗涤、封闭、干燥制得包被有热休克蛋白groEL的酶标板。

所述载体pTrchis2C的链接位点为Xho I和Kpn I。

所述包被蛋白的浓度为1μg/ml，包被的量为100μl/well。

所述包被的条件为4℃包被过夜或37℃包被2h。

本发明提供的试剂盒中，还包括Elisa检测试剂。

本发明还提供了一种非诊断目的的幽门螺杆菌的分型检测方法，为将待测样品稀释后，与包被有热休克蛋白groEL的酶标板共同孵育，经洗涤、与二抗孵育后，进行显色，根据显色结果判断是否感染毒力型幽门螺杆菌。