[发明专利]生物炭负载促生菌的生物肥料及其制备方法

权利要求书

1.生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

S1、菌悬液的制备：所述菌悬液为IAA产生菌的菌悬液；

S2、制备生物炭负载促生菌的生物肥料：在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中添加生物炭，混合均匀后于25-35℃恒温震荡4-8h制成生物炭负载促生菌的生物肥料；所述生物炭与IAA产生菌的菌悬液的质量体积比为1g：2-3ml。

2.根据权利要求1所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于所述步骤S2为：

在步骤S1所得的IAA产生菌的菌悬液中按照1g：2.5ml的质量体积比加入生物炭，混合均匀后于30℃恒温震摇6h，将IAA产生菌负载到生物炭上，获得生物炭负载促生菌的生物肥料。

3.根据权利要求1或2所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于：

所述步骤S1中菌悬液的制备的方法具体包括以下步骤：

1.1、将IAA产生菌的种子液按0.5-2％的接种量接种至LB液体培养基中，于25-35℃，150-200rpm恒温振荡培养箱中培养12-18h，制备获得初始菌悬液；

1.2、将步骤1.1所得初始菌悬液的OD600值调节至0.7-0.9；

1.3、将步骤1.2所得初始菌悬液进行清洗后获得菌悬液。

4.根据权利要求3所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于：

所述步骤1.1中初始菌悬液的具体制备方法为：将IAA产生菌的种子液按1％的接种量接种至LB液体培养基中，于30℃，180rpm恒温振荡培养箱中培养16h。

5.根据权利要求4所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于：

所述步骤1.3中对初始菌悬液进行清洗后获得菌悬液的方法为：

将步骤1.2所得的初始菌悬液于3-5℃，3800-4200rpm离心20-40min后倒掉液体，再用等体积的灭菌后0.85％NaCl溶液悬浮菌体，重复进行于3-5℃，3800-4200rpm离心20-40min的清洗两次，之后将洗净的菌体用等体积灭菌后0.85％NaCl溶液悬浮制备菌悬液。

6.根据权利要求5所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于：

所述步骤1.3中对初始菌悬液进行清洗后获得菌悬液的具体方法为：

将步骤1.2所得的初始菌悬液于4℃，4000rpm离心30min后倒掉液体，再用等体积的灭菌后0.85％NaCl溶液悬浮菌体，重复进行于4℃，4000rpm离心30min的清洗两次，之后将洗净的菌体用等体积的灭菌后0.85％NaCl溶液悬浮制备菌悬液。

7.根据权利要求1-6任一所述的生物炭负载促生菌的生物肥料的制备方法，其特征在于：

所述IAA产生菌为Agrobacterium vitis NBRC 15140或Bacillus aryabhattaiB8W22；

所述生物炭为松木生物炭。

8.利用如权利要求1-7任一所述的方法制备获得的生物炭负载促生菌的生物肥料。