[发明专利]一种用于研究细菌中类泛素系统的试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201810265138.2 | 申请日： | 2018-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN108414772B | 公开（公告）日： | 2021-02-09 |
| 发明（设计）人： | 徐西兵;沈国民;曹青;沈滟 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/25 | 分类号： | C12Q1/25;G01N33/68 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 张兵兵 |
| 地址： | 471003 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 研究 细菌 中类泛素 系统 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种用于研究细菌中类泛素系统的试剂盒，其特征在于：包括ThiS蛋白和ThiF蛋白，或者包括用于表达ThiS蛋白和ThiF蛋白的载体或菌种，还包括反应缓冲液、DTT和ATP，所述反应缓冲液中包括MgCl2和Tris-HCl，所述反应缓冲液中MgCl2和Tris-HCl的摩尔浓度比为2.3-2.7：45-55；所述ThiS蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，ThiF蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述ThiS蛋白和ThiF蛋白由基因工程的方法制备得到，具体为：将thiS基因和thiF基因分别克隆到表达载体pET28-a中，转化到大肠杆菌中，诱导表达、纯化即得。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述用于表达ThiS蛋白和ThiF蛋白的载体中包含thiS基因和/或thiF基因。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述用于表达ThiS蛋白和ThiF蛋白的菌种中包含具有thiS基因和/或thiF基因的载体。
5.如权利要求1所述的试剂盒在研究体外类泛素化系统中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：将底物蛋白、ThiS蛋白和ThiF蛋白加入到使用浓度的反应缓冲液中，然后加入ATP和DTT，于28-32℃反应4-6h。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述ThiS蛋白、ThiF蛋白和底物蛋白的质量浓度比为4：2-4：1-4。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述ThiS蛋白的使用浓度为0.15-0.25 μg/μL。
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