[发明专利]一种配子缓冲液及其缓冲体系

说明书

本发明属于辅助生殖领域，具体涉及一种配子缓冲液。本发明的配子缓冲液采用MOPS、HEPES混合的缓冲体系，相较于普通的仅使用MOPS或HEPES缓冲体系的配子缓冲液，能控制pH在更窄的范围内，且减少MOPS或HEPES组分的浓度又能减小细胞毒性。因此，本发明的配子缓冲液能够在配子采集和准备时提供更稳定的pH值，减小环境的波动，从而保持配子的活力。使用该配子缓冲液洗涤的配子，在后期胚胎实验中囊胚成型率大大提高，且形态均匀。

技术领域

本发明属于辅助生殖领域，具体涉及一种配子缓冲液的缓冲体系及由其制备的配子缓冲液。

背景技术

配子是指生物进行有性生殖时由生殖系统所产生的成熟性细胞，简称生殖细胞。配子分为雄配子(male gamete)和雌配子(female gamete),动物和植物的雌配子通常称为卵细胞(ova,或egg),而将雄配子称为精子(sperm)。

配子缓冲液是一种含抗菌素、基础离子以及各种丰富能量物质的缓冲液，在培养箱外用于卵细胞和精子的洗涤，为IVF(体外受精)做准备。

自IVF领域诞生以来，科学家们一直在努力研究健康的胚胎植入，这是生殖学研究的中心目标。配子采集和准备可能是体外受精中最紧张的一步。环境的剧烈波动会严重削弱配子的活力，从而对胚胎的质量和生存能力造成毁灭性的影响。IVF中随后的操作过程是否成功则取决于卵母细胞内稳态能否得以维持。配子缓冲液可以维持卵母细胞的新陈代谢，减轻应激效应对配子的影响，从而为受精做好准备。

目前，传统的配子缓冲液中多采用MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸)、HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、或碳酸氢钠-二氧化碳缓冲对。虽然MOPS和HEPES被广泛用于辅助生殖领域，但往往忽视了温度对两者pKa值的影响，以及MOPS受光照的影响。因此，缓冲对对配子和胚胎质量的潜在危害，促使我们重新评估目前用于临床体外受精的pH缓冲系统。

因此开发一种pH更为稳定的配子缓冲液缓冲体系，以及应用该体系制备的配子缓冲液。本发明的配子缓冲液减小pH对配子活力的影响，使用该配子缓冲液洗涤的配子，在后期胚胎实验中囊胚成型率大大提高，且形态均匀。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种配子缓冲液的缓冲体系，其能提供更稳定的pH环境，从而降低环境对配子活力的伤害。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种配子缓冲液的缓冲体系，其同时包含MOPS和HEPES。

MOPS和HEPES均为以胺基磺酸为基础的两性离子，作为两性电解质，能够提供较为稳定的pH梯度。传统的配子缓冲液中多采用MOPS、HEPES、或碳酸氢钠-二氧化碳缓冲对。

本发明人员发现MOPS和HEPES结合使用，能控制pH在更窄的范围内，同等浓度下比单一的缓冲对有更强的缓冲能力。因此使用MOPS和HEPES缓冲体系，能够减小配子的应激效应，为后续的IVF做好准备。

同时，同等浓度的MOPS和HEPES缓冲体系与单一缓冲对相比，减小了缓冲对对细胞毒性，更有利于配子保持活力。

作为优选的方案，上述缓冲体系中MOPS、HEPES浓度均为8-12mmol/L。

作为优选的方案，上述缓冲体系pH值为7.25-7.35。

本发明的目的之二在于提供一种目的一的缓冲体系制备的配子缓冲液，其pH更稳定，减小配子的应激效应。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

采用目的一的缓冲体系，添加配子所需的营养及能量物质，配制成配子缓冲液。

作为优选的方案，上述配子缓冲液包含钠、钾、钙、镁离子，并以葡萄糖、丙酮酸钠、白蛋白为能量物质。