[发明专利]一种核酸分子及其在人源化抗体中的应用

权利要求书

1.一种核酸分子，包括了免疫球蛋白基因或其片段，其特征在于：包括了IgM基因（IgHCμ）和IgM转换元件（switch region，Sμ），所述Sμ和IgHCμ全部为宿主动物序列。

2.如权利要求1所述的核酸分子，所述IgHCμ包括CH1、 CH2、CH3、CH4外显子以及之间的序列，和TM1、TM2、polyA信号序列。

3.如权利要求1或2所述的核酸分子，所述Sμ的核苷酸序列如SEQ ID NO.1中（2550）..（4451）所示。

4.如权利要求1-3任一所述的核酸分子，其特征在于：包括了宿主动物IgH重链的5'-端的增强子（5’-Enhancer）。

5.如权利要求4所述的核酸分子，5’-Enhancer的核苷酸序列为SEQ ID NO.1（433）..（1444）所示。

6.如权利要求1-5任一所述的核酸分子，其结构如图1-1所示。

7.如权利要求1-6任一所述的核酸分子，其特征在于：包括IgG基因（Igγ）。

8.如权利要求7所述的核酸分子，IgG基因为宿主动物/人IgG嵌合元件或全人IgG序列。

9.如权利要求8所述的核酸分子，所述嵌合元件包括宿主动物Igγ的转换元件（Sγ）和TM1和TM2、polyA等序列，以及人的CH1、Hinge、CH2、CH3外显子以及之间的序列等。

10.如权利要求8或9所述的核酸分子，IgG基因结构如图2-1所示。

11.如权利要求8所述的核酸分子，所述全人IgG序列包括：人的转换元件（Sγ）、人Igγ的CH1、Hinge、CH2和CH3外显子以及之间的序列，和人Igγ的PolyA、TM1、 TM2等序列。

12.如权利要求8-11任一所述的核酸分子，所述Igγ序列包括Igγ的单种或多种亚型，多种Igγ亚型间的转换元件（Sγ）。

13.如权利要求8-12任一所述的核酸分子，人Igγ亚型包括Igγ3、Igγ1、Igγ2和/或Igγ4；小鼠Igγ亚型包括Igγ3、Igγ1、Igγ2a和/或Igγ2b等。

14.如权利要求8-13任一所述的核酸分子，包括人或宿主动物IgH重链的3’-位置表达调控序列（Local Control Region）。

15.如权利要求8-14任一所述的核酸分子，包括了人IgH重链 V-区序列或片段，人IgHD-区序列或片段，和人IgH J-区序列或片段。

16.如权利要求1-15所述的核酸分子，其结构组成如图5或图6所示。

17.一种载体，包含如权利要求1-16所述的核酸分子。

18.一种细胞，包含如权利要求1-16任一所述核酸分子或权利要求17所述载体。

19.一种人源抗体，来源于权利要求1-16任一核酸分子或权利要求17所述载体或或权利要求18所述细胞。

20.权利要求1-16任一所述核酸分子或权利要求17所述载体或权利要求18所述细胞在编码DNA、cDNA、mRNA，表达氨基酸序列、蛋白质、载体，培养杂交瘤、细胞株、转基因动物和/或制备人源抗体中的应用。

21.采用权利要求1-16任一所述核酸分子或权利要求17所述载体或权利要求18所述细胞制备转基因动物的方法，包括以下步骤：

（1）所述核酸分子的获得；

（2）将所述核酸分子构建入载体；

（3）向宿主动物细胞或胚胎导入所述载体；

（4）将含有上述载体的细胞植入宿主动物的胚胎内或体细胞克隆；

（5）繁殖杂合、纯合的转基因动物。