[发明专利]一种核酸分子及其在制备人源单域抗体中的应用

权利要求书

1.一种核酸分子，包括了免疫球蛋白基因或其片段，其特征在于：包括IgG基因（Igγ）和IgG转换元件（Sγ）和/或IgM基因（IgHCμ）和IgM转换元件（Sμ）；其中IgM基因/IgG基因缺失CH1功能。

2.如权利要求1所述的核酸分子，所述Sμ、Sγ、IgHCμ为宿主动物序列。

3.如权利要求1或2所述的核酸分子，所述IgHCμ包括宿主动物IgM的CH2、CH3、CH4外显子及之间的序列，以及TM1、TM2、polyA信号。

4.如权利要求1-3任一所述的核酸分子，所述IgHCμ结构如图3-1所示。

5. 如权利要求1-4任一所述的核酸分子， 所述Igγ包括Hinge、CH2、CH3外显子及之间的序列，以及TM1、TM2、polyA信号。

6.如权利要求1-5任一所述的核酸分子，所述TM1、TM2、polyA信号为宿主动物序列。

7.如权利要求1-6任一所述的核酸分子，所述Igγ结构如图1-1所示。

8.如权利要求1-7任一所述的核酸分子，包括宿主动物IgH重链的5'-端的增强子（5’-Enhancer）。

9.如权利要求1-8任一所述的核酸分子，所述Sγ为Sγ1、Sγ3、Sγ2a和/或Sγ2b。

10. 如权利要求1-9任一所述的核酸分子，所述Sμ的核苷酸序列如SEQ ID NO.2（2550）..（4451）所示。

11. 如权利要求1-10任一所述的核酸分子，所述增强子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2的（433）..（1444）所示。

12.如权利要求1-11任一所述的核酸分子，IgG基因为宿主动物/人IgG嵌合元件或全人IgG序列。

13.如权利要求12所述的核酸分子，所述Igγ序列包括人Igγ的单种或多种亚型，和宿主动物的格种Igγ亚型的位置转换元件（Sγ）。

14.如权利要求13所述的核酸分子，人Igγ亚型包括Igγ3、Igγ1、Igγ2和/或Igγ4。

15. 如权利要求1-14任一所述的核酸分子，包括人或宿主动物IgH重链的3’-位置表达调控序列（Local Control Region）。

16. 如权利要求1-14任一所述的核酸分子，包括了人IgH重链 V-区序列或片段，人IgHD-区序列或片段，和人IgH J-区序列或片段。

17.如权利要求1-16所述的核酸分子，其结构组成如图6或图7所示。

18.一种载体，包含如权利要求1-17所述的核酸分子。

19.一种细胞，包含如权利要求1-17任一所述核酸分子或权利要求18所述载体。

20.一种人源抗体，来源于权利要求1-17任一核酸分子或权利要求18所述载体或或权利要求19所述细胞。

21.权利要求1-17任一所述核酸分子或权利要求18所述载体或权利要求19所述细胞在编码DNA、cDNA、mRNA，表达氨基酸序列、蛋白质、载体，培养杂交瘤、细胞株、转基因动物和/或制备人源单域抗体中的应用。

22.采用权利要求1-17任一所述核酸分子或权利要求17所述载体或权利要求18所述细胞制备转基因动物的方法，包括以下步骤：

（1）所述核酸分子的获得；

（2）将所述核酸分子构建入载体；

（3）向宿主动物细胞或胚胎导入所述载体；

（4）将含有上述载体的细胞植入宿主动物的胚胎内或体细胞克隆；

（5）繁殖杂合、纯合的转基因动物。