[发明专利]一种小鼠胚胎移植胶及其制备方法

说明书

本发明公开了一种小鼠胚胎移植胶及其制备方法，所述小鼠胚胎移植胶是将孕马血清、绒毛膜促性腺激素、羊膜物质、小鼠血浆、链霉素添加于pH为7.0～7.2、浓度为20mmol/L的HEPES缓冲液中制备所得；每mL的HEPES缓冲液中各物质的添加量如下：孕马血清0.01～0.05μg，绒毛膜促性腺激素100～375单位，链霉素50～70μg，羊膜物质20μL，小鼠血浆8～10μL。本发明提供的小鼠胚胎移植胶不仅能够将胚胎粘附在子宫上，提高胚胎的着床率，还为胚胎着床后的生长提供营养，大大提高了小鼠胚胎的存活率。

技术领域

本发明属于生殖技术领域，特别是涉及一种小鼠胚胎移植胶及其制备方法。

背景技术

哺乳动物胚胎移植技术是实验胚胎学、遗传学、发育生物学研究中的一项重要技术，胚胎移植，就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移植技术中小鼠是最主要的模式哺乳动物，小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。小鼠胚胎移植，即通过体外受精或其他方式得到的胚胎移植到假孕受体，使胚胎在体内发育并生崽。在小鼠胚胎移植过程中，胚胎会急剧变形且胚胎移植的着床率低，胚胎移植后发育不稳定，从而导致流产率较高。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种小鼠胚胎移植胶及其制备方法，所提供的小鼠胚胎移植胶能够显著提高小鼠胚胎的着床率和发育稳定性，大大提高了小鼠胚胎移植的成功率。

本发明的一个目的是提供一种小鼠胚胎移植胶，所述小鼠胚胎移植胶是将孕马血清、绒毛膜促性腺激素、羊膜物质、小鼠血浆、链霉素添加于pH为7.0～7.2、浓度为20mmol/L的HEPES缓冲液中制备所得；

每mL的HEPES缓冲液中各物质的添加量如下：孕马血清0.01～0.05μg，绒毛膜促性腺激素100～375单位，链霉素30～50μg，羊膜物质20μL，小鼠血浆8～10μL；

所述羊膜物质是通过如下方法制备得到的：

以小鼠分娩后的羊膜为原料，经胰蛋白酶联合Triton X-100的脱细胞处理后，得到脱细胞羊膜，再在液氮冷冻条件下进行高速研磨，并用钴60辐照消毒，得到粒状羊膜；将脐带间充质干细胞接种于所述粒状羊膜上，联合培养5～8h，用生理盐水重悬，即得到所述羊膜物质。

优选地，每1mg粒状羊膜上接种1～1.5×10⁵个脐带间充质干细胞。

本发明的第二个目的是提供上述小鼠胚胎移植胶的制备方法，包括如下步骤：

S1：羊膜物质的制备

以小鼠分娩后的羊膜为原料，经胰蛋白酶联合Triton X-100的脱细胞处理后，得到脱细胞羊膜；在液氮冷冻条件下，将得到的脱细胞羊膜进行高速研磨，得到颗粒碎片，并对得到的颗粒碎片用钴60辐照消毒，得到粒状羊膜；按照每1mg粒状羊膜上接种1～1.5×10⁵个脐带间充质干细胞的比例，将脐带间充质干细胞接种于所述粒状羊膜上，联合培养5～8h，得到干细胞-粒状羊膜混合物，混合物过120μm筛网后用生理盐水重悬得到所述羊膜物质；

S2：小鼠血浆的制备

取小鼠离体的新鲜血液样品，通过离心获得富含血小板的血浆，于4℃保存备用，5天内使用；

S3：按照比例分别取孕马血清、绒毛膜促性腺激素、羊膜物质、小鼠血浆、链霉素和pH为7.0～7.2、浓度为20mmol/L的HEPES缓冲液，将各物质混合均匀，即得到所述小鼠胚胎移植胶。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：