[发明专利]一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，包括有扩增乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）全部外显子以及各外显子上下游不少于10bp的DNA序列的扩增盒、扩增产物文库构建盒、文库构建连接特异性接头盒、检测试剂盒外包盒和磁珠盒；本发明利用扩增子捕获测序的技术，大大降低了常规探针捕获测序技术的难度、复杂度，同时有效的降低了技术成本，有利于临床遗传性乳腺癌和卵巢癌筛查检测的推广和使用。

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，具体是一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌发生于乳腺上皮组织，是一种全身性疾病。其生物学特征之一是早期可以发生隐匿性转移病灶，病灶发展往往经过数年或更长时间。乳腺癌世界各地均有，其发病率呈现出发达地区高于欠发达地区，城市高于农村的特点。随着经济的发展，我国乳腺癌发病率呈现逐年上升的态势。我国每年新增数百万人发病，女性占99%，男性占1%。

乳腺癌易感基因（BRCA）是重要的抑癌基因与肿瘤易感基因，包括BRCA1及BRCA2。BRCA在DNA修复的同源性重组机制中扮演重要角色，BRCA基因突变会导致基因组不稳定性显著增加。胚系BRCA1/2突变将显著提高女性乳腺癌、卵巢癌以及其他癌症的发病风险。随着精准医学和靶向治疗的进展，对相关肿瘤患者血液和/或肿瘤组织进行BRCA突变检测将有助于更好地判断预后、选择靶向药物、选择化疗方案、在适当的条件下对家族遗传史患者亲属的患病风险进行评估，帮助医师根据患者的基因状态来选取更精准的治疗方案。

BRCA1/2基因序列较长，截止至2017年12月，BIC报道了约1800个BRCAl和2000多个BRCA2突变。这些突变中，53-55％都是个体突变，仅在个别家族中发现。这些突变位点分散遍布于2个基因的全长，很难找到固定的突变热点---且即使存在突变热点，在不同地域以及不同种族之间差异也很大，存在不同的种族、不同地域的“始祖突变”。近年来，随着二代测序（NGS）技术的飞速发展，NGS技术越来越多地应用于BRCA基因突变的临床检测。作为新一代测序技术，Ion Torrent测序技术以高通量、高敏感度、测序时间短、成本低等优势，打破了传统基因诊断技术的局限性，为大规模开展肿瘤基因筛查诊断提供了重要的技术支持。使得BRCA基因检测不仅仅局限于“始祖突变”的检测，而检测其全长一般作为了大家的首选。2017年，CFDA（国家食品药品监督管理总局）正式批准了DA8600高通量基因测序仪（基于Ion Proton测序平台）适应症变更，扩增了人体基因位点检测的内容，可用于肿瘤和遗传疾病临床检测。NGS技术在肿瘤领域对肿瘤基因的检测中潜藏着巨大的应用价值。

BRCA变异类型主要包括点突变、小片段插入/缺失和大片段重排等。除BRCA基因编码区的变异外，靠近外显子的内含子区域发生的一些突变也可能会影响蛋白质功能，因此BRCA检测必须同时覆盖编码区和相邻边界区。现有的很多乳腺癌检测试剂盒只能检测几个“始祖突变”，或采用sanger测序的方法，不仅会遗漏多个致病突变并且加大了使用成本，花费时间长。多重PCR技术可将BRCA1/2基因全部外显子以及外显子内含子拼接区域进行扩增，获得目的片段。将获得的目的片段进行文库构建，并在DA8600测序仪或Proton测序仪等高通量测序平台进行测序，通过生物信息软件分析，检出与疾病相关的致病突变。整个流程准确性高、测序时间和成本低、操作简单，适合大规模应用于肿瘤的早期筛查、个体化治疗以及临床研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种人BRCA1/BRCA2基因突变检测试剂盒，包含扩增乳腺癌易感基因（BRCA1和BRCA2）全部外显子以及外显子内含子拼接区域DNA片段的扩增盒、扩增产物构建文库的文库构建盒、构建文库过程中连接特异性接头至目的片段两端所需要的接头盒、检测试剂盒外包盒、磁珠盒。