[发明专利]靶向肝癌的自噬siRNA-Fingolimod共递送脂质纳米颗粒

说明书

本发明涉及制药领域，尤其是靶向递送药物制剂领域，具体涉及靶向肝癌的自噬siRNA‑Fingolimod共递送纳米载药系统、及其制备方法与用途。本发明公开了靶向肝癌的自噬siRNA‑Fingolimod共递送纳米载药系统。本发明公开了一种用于主动靶向肝癌的共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720的纳米载药系统LCP‑II‑sibeclin1‑FTY720的制备方法。药理学实验表明，本发明的纳米载药系统同时载有beclin1的siRNA和FTY720、主动靶向肝癌并递送进入肝癌细胞内、在肝癌细胞内酸性环境下释放，具有协抗肝癌的作用，具有开发抗肝癌药物的价值。

技术领域

本发明涉及制药领域，尤其是靶向递送药物制剂领域，具体涉及靶向肝癌的自噬siRNA-Fingolimod共递送脂质纳米颗粒、及其制备方法与用途。

背景技术

我们的研究发现Fingolimod(FTY720，芬戈利德)能够有效的诱导肝癌细胞凋亡，而且如果能够同时抑制肝癌细胞的自噬，FTY720抗肝癌的效果会更好，因此同时应用FTY720和靶向自噬的SiRNA具有协同抗肝癌的作用。但是，在应用FTY720和靶向自噬的SiRNA的过程中遇到了问题，一是如果直接给予FTY720和靶向自噬的SiRNA，在体内的靶向性差会诱导正常细胞凋亡，引起严重的不良反应；另外，由于SiRNA的负电性以及FTY720的对溶剂的依赖性，一次给药能够同时递送FTY720和靶向自噬的SiRNA也难以实现。本实验运用一个新的载药系统，能够共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720。该载药系统为脂质纳米颗粒，表面接有叶酸即FA，FA作为配体可以结合肝癌细胞表面高表达的叶酸受体起到主动靶向的作用。该载药系统的磷酸钙核即CaP core遇酸可以反应，起到在肝癌细胞内的酸性环境下释放的目的。而且该载药系统同时载有靶向自噬蛋白beclin1的siRNA和诱导肝癌细胞凋亡的FTY720，起到协同诱导肝癌细胞凋亡的目的。

发明内容

本发明公开了一种用于主动靶向肝癌的共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720的纳米载药系统LCP-II-sibeclin1-FTY720。该载药系统为脂质纳米颗粒，表面接有叶酸即FA，FA作为配体可以结合肝癌细胞表面高表达的叶酸受体起到主动靶向的作用。而且该载药系统的磷酸钙核即CaP core遇酸可以反应，起到在肝癌细胞内的酸性环境下释放的目的。另外，该载药系统同时载有靶向自噬蛋白beclin1的siRNA和诱导肝癌细胞凋亡的FTY720，起到协同诱导肝癌细胞凋亡的目的。

本发明公开了一种用于主动靶向肝癌的共载自噬蛋白beclin1的siRNA和FTY720的脂质纳米颗粒LCP-II-sibeclin1-FTY720，该脂质纳米颗粒按照如下方法制备：

1)300μL的500mM的CaCl₂和100μL的2mg/mL的自噬蛋白beclin1的siRNA分散于15ml环己烷/表面活性剂Igepal CO-520混合液中，体积比为71/29，以此制备油包水微乳液；

2)接着，300μL的25mM的pH＝9.0的Na₂HPO₄分散于另外一个15ml环己烷/表面活性剂IgepalCO-520混合液中，体积比为71/29，并加入200μL溶于三氯甲烷的20mg/mL的DOPA，以此来制备磷酸相；

3)然后，将两者混合搅拌20分钟，将30mL无水乙醇加入到混合物中，并以12,000g离心20分钟以除去环己烷/表面活性剂；

4)用乙醇洗涤2-3次后，加入1mL氯仿，得到磷酸钙核即CaP core，然后储存在玻璃小瓶中；