[发明专利]一种光合细菌筛选培养方法

权利要求书

1.一种光合细菌筛选培养方法，其特征在于：该细菌筛选培养方法采用如下培养系统，该培养系统包括光照模块(1)、培养箱(2)、控制器一(3)、搅拌模块(4)、环境调节模块(5)、营养箱(6)和气体交换模块(7)，所述培养箱(2)用于培养光合细菌；所述光照模块(1)位于培养箱(2)一侧，光照模块(1)用于光合细菌光合作用；所述光照模块(1)中设置有循环管(11)且循环管(11)的两端均与培养箱(2)接通；所述循环管(11)上设置有输液泵一(111)，输液泵一(111)用于输送循环管(11)内的液体；所述搅拌模块(4)安装于培养箱(2)上端，搅拌模块(4)用于将培养箱(2)内的光合细菌与营养液搅拌均匀；所述控制器一(3)位于搅拌模块(4)上端，控制器一(3)用于调节和控制搅拌模块(4)、气体交换模块(7)、环境调节模块(5)和营养箱(6)；所述环境调节模块(5)布置于培养箱(2)上，环境调节模块(5)用于调节培养箱(2)内的环境；所述营养箱(6)位于搅拌模块(4)旁侧，且营养箱(6)与培养箱(2)接通，营养箱(6)用于暂存营养液和向培养箱(2)内输送培养液；所述气体交换模块(7)位于培养箱(2)旁侧且气体交换模块(7)与培养箱(2)接通，气体交换模块(7)用于更换培养箱(2)内气体以及除去气体中的氧气；所述培养箱(2)的上端设置有菌液进入口(21)，培养箱(2)的下端设置有菌液出液口(22)；

该细菌筛选培养方法包括如下步骤：

a.取样：从水库底泥中取泥水，低温带回；

b.开启培养系统：取样过后，对培养系统进行灭菌处理，并利用控制器一(3)的控制，通过环境调节模块(5)调节培养箱(2)内的温度为28℃±1℃，通过气体交换模块(7)更新培养箱(2)内的气体，并将培养箱(2)内的氧气除去；

c.富集液配制：完成步骤b后，取含有2％盐的盐水，并加入：NH₄Cl、CH₃COONa、MgSO₄·7H₂O、酵母膏和蛋白胨，调pH到7.0，121℃灭菌30分钟；灭菌后加入NaHCO₃溶液和KH₂PO₄溶液后得到富集液；并将富集液投入营养箱(6)中；

d.富集：取步骤a中的泥水从菌液进入口(21)投入到培养箱(2)中，利用控制器一(3)的控制，将营养箱(6)内的富集液引入培养箱(2)内；通过搅拌模块(4)将富集液与泥水搅拌均匀得到混合菌液，通过环境调节模块(5)调节培养箱(2)内的混合菌液的PH为7.0，通过循环管(11)通过输送泵一输送混合菌液进入光照模块(1)中；调节光照模块(1)，使光照模块(1)对混合菌液进行光照，使光照强度不低于34μE·m^-2·s^-1的标准，光暗比为15h:9h；培养7天后，从菌液取出口(22)取出培养后的富集菌液；

e.分离纯化培养基配制：待完成步骤d后，取含有2％盐的盐水并加入：NH₄Cl、CH₃COONa、MgSO₄·7H₂O、酵母膏和琼脂，调节pH值为7.0,在121℃灭菌30分钟；灭菌后加入NaHCO₃和K2HPO₄；

f.分离纯化：在无菌环境下，移取d步骤中的富集菌液于无菌培养皿中，倾注冷却至50-55℃的步骤e所述培养基，缓慢摇匀，静置凝固，并用薄膜进行密封，于28℃±1℃静置培养，光照强度36μE·m^-2·s^-1，36小时保温箱内光照培养，通过观察，挑取红色单菌落，重复在e所述培养基中进行划线分离，获得红假单胞菌属光合细菌；

g.批量生产：取f中获得的红假单胞菌属光合细菌，重复步骤b、c的操作，将d步骤中的泥水更换为获得的红假单胞菌属光合细菌再重复d步骤，即可量产红假单胞菌属光合细菌。