[发明专利]一种检测核酸固体样品甲胺及甲胺盐溶剂残留的方法

说明书

本发明公开了一种检测核酸固体样品甲胺及甲胺盐溶剂残留的方法，步骤如下：采用甲胺和三乙胺‑异丙醇溶液配置对照品溶液；采用样品和三乙胺‑异丙醇溶液进行分散离心，取上清液，获得供试品溶液；采用三乙胺‑异丙醇溶液作为空白溶剂；采用配备FID检测器的气相色谱仪作为检测仪器，分别将空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液进样，进行气相色谱检测，获取检测结果。本发明采用了异丙醇衍生化法使甲胺被异丙醇衍生成较大分子，从而能延长保留时间，提高分离度，提高FID检测的灵敏度，通过加入三乙胺是甲胺盐以甲胺的形式游离处理提取出来，从而保证检测的准确性，解决了甲胺难以被检测的技术难题。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种检测核酸固体样品甲胺及甲胺盐溶剂残留的方法。

背景技术

甲胺在很多生产领域应用广泛，主要用作医药(咖啡因、麻黄素等)、农药(西维因、乐果、杀虫脒等)、染料(茜素中间体、蒽醌系中间体等)、炸药及燃料，表面活性剂、促进剂、以及橡胶助剂、照相化学品和溶剂等的原料。另外在核酸合成工艺中，常用在核酸脱保护和纯化过程中。

在医药和核酸生产过程，由于甲胺碱性强，常以甲胺盐形式存在，极其难以挥发。因此在产品的生产过程中，甲胺容易形成残留。目前甲胺在《中国药典》2015版并没有规定其残留量，在分类中属于第四类溶剂(尚无足够毒理学资料)。但是在很多文件中有说明其有吸入危害和皮肤灼伤的情况发生。

目前的甲胺的分析方法有：使用离子色谱法检测甲胺的方法，该方法用于控制副产物的，难以达到溶剂残留所需要的灵敏度。在甲胺残留残留测试时，甲胺由于沸点低导致样品在气相色谱中难以保留；碱性强、易成盐的特点使之无法成气态被气相所检测；在FID检测器中响应值低，难以达到要求的灵敏度；液相也无法保留且没有合适的检测器来检测甲胺。因此，如何实现甲胺及甲胺盐溶剂残留的检测，是亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测核酸固体样品甲胺及甲胺盐溶剂残留的方法，采用异丙醇衍生化法，衍生化法中甲胺被异丙醇衍生成较大分子，并通过三乙胺抑制其成盐从而能被检测器所检测，解决了灵敏度和准确度达不到检测要求的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测核酸固体样品甲胺及甲胺盐溶剂残留的方法，步骤如下：

1)制备对照品溶液：采用甲胺和三乙胺-异丙醇溶液配置对照品溶液；

2)制备供试品溶液：采用样品和三乙胺-异丙醇溶液进行分散离心，取上清液，获得供试品溶液；

3)制备空白溶剂：采用三乙胺-异丙醇溶液作为空白溶剂；

4)进样检测：采用配备FID检测器的气相色谱仪作为检测仪器，分别将空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液进样，进行气相色谱检测，获取检测结果。

作为本发明进一步的方案：所述三乙胺-异丙醇溶液中三乙胺的体积浓度为1％。

作为本发明再进一步的方案：步骤1)中，所述对照品溶液的制备方法如下：a)精确称取40％甲胺水溶液55mg，放入10mL容量瓶中，加入三乙胺-异丙醇溶液进行定容，摇匀，获得第一对照品储备液；b)精确量取第一对照品储备液200μL，放入10mL容量瓶中，加入三乙胺-异丙醇溶液进行定容，摇匀，获得第二对照品储备液；c)精确量取第二对照品储备液2mL，放入10mL容量瓶中，加入三乙胺-异丙醇溶液进行定容，摇匀，获得对照品溶液。

作为本发明再进一步的方案：步骤2)中，所述供试品溶液的制备方法如下：精确称取适量样品至离心管中，加入0.5-1.0mL的三乙胺-异丙醇溶液，离心处理10min，吸取上清液，获得供试品溶液。

作为本发明再进一步的方案：步骤2)中，所述离心处理的转速为4000-8000rpm。