[发明专利]鳜鱼伽玛干扰素相关因子及其重组蛋白和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体公开了鳜鱼伽玛干扰素相关因子及其重组蛋白和应用，本发明通过设计兼并引物扩增得到IFN‑γrel基因片段，race的方法扩增得到完整基因序列，以IFN‑γrel‑ORF‑F和IFN‑γrel‑ORF‑R为引物，以鳜的头肾和肠混合组织总RNA为模板扩增得到IFN‑γrel基因的完整开放阅读框，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，对应编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的IFN‑γrel重组的蛋白经初步验证能够诱导免疫相关基因Mx，IRF1，STAT1以及SOCS1的上调表达，可作为鱼类免疫增强剂或者免疫佐剂。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及鳜鱼伽玛干扰素相关因子及其重组蛋白和应用。

背景技术

1957年英国科学家Isaacs在利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感病毒干扰现象时首先发现干扰素(Interferon,IFN)，随后研究发现它是一种在先天性免疫和获得性免疫中起着重要作用的细胞因子，具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。干扰素广泛存在于脊椎动物中。根据基因结构，受体类型以及功能等的不同，将其可以分为I型、II型和III型。目前在鱼类中发现只存在I型和II型干扰素，至今没有III型干扰素的报道。

哺乳动物的II型干扰素只有一个成员，即伽玛干扰素(IFN-γ)，主要由CD4+辅助T淋巴细胞，CD8+细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞产生(Shtrichman et al.,2001)。随后研究发现B细胞，抗原递呈细胞等也可以产生IFN-γ。IFN-γ通过受体介导下游效应基因的表达从而实现其生物学功能，包括抗病毒，抗菌，免疫调节等。已有报道显示硬骨鱼类II型干扰素中有两个成员，即IFN-γ和伽玛干扰素相关因子(IFN-γrel)。近几年在鲤形目(Cypriniformes)，鲑形目(Salmoniformes)以及鲈形目(Perciformes)鱼类中报道了IFN-γ。研究发现鱼类的IFN-γ对于机体抵抗病原感染也具有非常重要的作用。但IFN-γrel似乎是硬骨特有的基因，目前对于此基因的报道还很少，近几年在鲤科鱼以及一些模式鱼类中有IFN-γrel基因的报道，而对于它的功能目前研究还很少。特别是鲈形目中是否存在IFN-γrel基因目前并不清楚。

鲈形目鱼类的一些种类，如我国重要的淡水养殖对象鳜(Siniperca chuatsi)，具有较高的经济价值。随着养殖规模的不断扩大以及养殖环境的变化，鳜的病害频繁发生，给养殖业造成了重大的经济损失，病害问题已严重困扰着鳜养殖的发展。目前在鱼类中报道的免疫增强剂来源包括人工合成、微生物来源及动植物来源。近年来随着鱼类细胞因子研究的深入，生物活性因子类免疫增强剂也受到了极大地关注。

目前未见有关鳜鱼中IFN-γrel基因序列及功能的报道。本发明通过基因克隆方法得到了鳜IFN-γrel，重组的IFN-γrel蛋白能够诱导抗病毒等免疫相关基因的上调表达，参与各种病原诱发的免疫过程。因此其作为免疫增强剂具有很好的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供了鳜鱼伽玛干扰素相关因子(IFN-γrel)，所述的鳜鱼伽玛干扰素相关因子的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

本发明的另一个目的在于提供了鳜鱼伽玛干扰素相关因子在制备鳜鱼免疫调节剂中的应用。

本发明还有一个目的在于提供了含有鳜鱼IFN-γrel的重组表达载体。

为实现上述目的，本发明采用以下技术措施: