[发明专利]一株能稳定分泌抗芋螺毒素的单克隆抗体细胞株及应用

说明书

本发明属于抗体工程领域，具体涉及一株能稳定分泌抗芋螺毒素（ω‑CTX MVIIA）的单克隆抗体细胞株及应用。该杂交瘤细胞株2E5，已于2018年1月31日在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，保藏编号是：CGMCC NO.15295。本发明以原核表达纯化GST‑ω‑CTX MVIIA重组抗原为免疫抗原，TRX‑ω‑CTX MVIIA重组抗原为检测抗原包被酶标板。通过iELISA法筛选获得一株阳性杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体为建立ω‑CTX MVIIA免疫检测方法奠定了基础。

技术领域

本发明属于细胞工程领域，具体涉及一株能稳定分泌抗芋螺毒素（ω-CTX MVIIA）单克隆抗体的杂交瘤细胞株（IgG）及其应用。

背景技术

芋螺毒素（Conotoxin，CTX）是芋螺（Cone snails）分泌的用于捕食和防御的一种具有生物活性的小分子多肽类神经毒素，一般含有10~30个氨基酸，大多富含二硫键，靶定神经系统的离子通道和受体，人和动物被叮咬后一般会出现麻痹、抽搐、惊厥甚至死亡。ω-芋螺毒素MVIIA（ω-CTX MVIIA）含有25个氨基酸残基，是特异与可逆的N-型电压敏感性钙离子通道的阻断剂，可当做镇痛剂治疗剧烈的和慢性的疼痛。是神经生物学、药物药理学、多肽化学、分子生物学等领域的研究热点，因此对其检测有重要意义。

目前芋螺毒素的检测方法有高效液相色谱法(High performance liquidchromatography, HPLC)、电喷雾-四极杆-飞行时间质谱法（Electrospray ionization/quadrupole time of flight mass spectrometry，ESI-Qq-TOF-MS）、铜螯合纳米磁珠结合生物质谱法（Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry，MALDI-TOF-MS）等。这些方法具有比较高的灵敏度，可以精确的分析样品中毒素的含量，但是其设备昂贵、对样品的纯度要求高、操作复杂、需要经过专业培训的人员操作，因此不适合推广。免疫分析法（immuno-analysis）是近十多年来发展起来的新方法，是将抗原抗体反应与灵敏的检测系统结合而成的一种分析方法，具有特异性好，灵敏度高，操作技术简单，成本低，对样品的纯度要求不高等优点，特别适合于大批量样本的检测，近年来被广泛普及应用于各种毒素的检测。所以，近十几年来用于生物毒素检测的酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）方法得到迅速发展。

由于ω-CTX MVIIA是小分子多肽，具有抗原性但不具有免疫原性，直接免疫动物无法获得相应的抗体，因此较少看到ω-CTX MVIIA的免疫学检测方法。只有基于多克隆抗体、单链抗体和单克隆抗体（IgM）的ω-CTX MVIIA免疫检测方法，而未见基于单克隆抗体（IgG）的ω-CTX MVIIA免疫分析。因此，制备出能稳定分泌抗ω-CTX MVIIA的单克隆抗体（IgG）杂交瘤细胞株，为商品化开发生产高质量的酶联检测试剂盒奠定坚实的基础。

发明内容

本发明目的是提供一株能稳定分泌抗ω-CTX MVIIA单克隆抗体（IgG）的杂交瘤细胞株。

本发明首先保护一株杂交瘤细胞株2E5，分类命名为抗芋螺毒素（ω-CTX MVIIA）单克隆抗体杂交瘤细胞株，已于2018年1月31日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号是:CGMCC NO.15295。

其次保护一种由所述杂交瘤细胞株2E5产生的单克隆抗体（IgG）。

所述的单克隆抗体的制备方法，是将杂交瘤细胞株2E5，通过制备腹水和纯化，获得单克隆抗体（IgG）。

本发明还保护了所述杂交瘤细胞株2E5产生的单克隆抗体的应用，是将杂交瘤细胞株2E5产生的单克隆抗体（IgG）用于检测ω-CTX MVIIA。