[发明专利]一种具有降糖活性的苦瓜皂苷和多糖双水相一步提取方法

权利要求书

1.一种苦瓜皂苷和苦瓜多糖双水相一步提取方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

(1)制备苦瓜皂苷和苦瓜多糖粗提液：取干燥的苦瓜粉于异丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相体系中，震荡混匀，使用超声-微波协同萃取/反应仪进行提取；待提取结束后，离心分离上下相，得到富集皂苷的上相，即苦瓜皂苷粗提液；富集多糖的下相，即苦瓜多糖粗提液；

(2)制备苦瓜皂苷提取液：将苦瓜皂苷粗提液经旋转蒸发至无醇味，制得苦瓜皂苷提取液；

(3)制备苦瓜皂苷精提液：将苦瓜皂苷提取液进一步通过AB-8型大孔树脂静态吸附纯化，制得苦瓜皂苷精提液；

(4)制备苦瓜多糖精提液：将苦瓜多糖粗提液经无水乙醇醇沉、丙酮洗涤、透析除盐，制得苦瓜多糖精提液；

(5)冷冻干燥制备苦瓜皂苷和苦瓜多糖成品。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)异丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相萃取条件为：系线长度为65，上相与下相体积比为1，其中各组分质量分数分别为15.33%(NH₄)₂SO₄、31.61%异丙醇，其余用0.01mol/L PBS缓冲液补齐。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)超声-微波协同萃取/反应仪为CW-2000型，超声波功率为50W，微波功率为800W。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中苦瓜粉与异丙醇/(NH₄)₂SO₄双水相体系的质量比为1:70(g/g)，提取时间为15min，提取温度为70℃，离心条件为4000rpm离心10min。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中大孔树脂纯化苦瓜皂苷的具体步骤如下：

静态吸附：取5-8g预处理好的大孔树脂，将其倒入装有100-150mL苦瓜皂苷提取液的锥形瓶中，于25℃恒温振荡器中以160r/min震荡8h；

静态解吸：用双蒸水冲洗大孔树脂，待洗至用苯酚-硫酸法检测不显红色为止，抽滤至干，将大孔树脂倒入装有100-150mL无水乙醇的锥形瓶中，于25℃恒温振荡器中以160r/min震荡1h；过滤后将醇溶液旋转蒸发至无醇味，即制得苦瓜皂苷精提液。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中所述无水乙醇醇沉主要为：向苦瓜多糖粗提液中加入4倍体积无水乙醇醇沉，静置12h或过夜。

7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中所述透析除盐的步骤为：将丙酮洗涤后的多糖沉淀复溶于双蒸水，倒入3500Da的透析袋中进行透析30-40h。