[发明专利]长裙竹荪、短裙竹荪、棒竹荪的完整ITS序列及用其鉴定竹荪品种的方法

说明书

本发明涉及一种真菌品种的DNA序列及利用该序列鉴定其品种的分子鉴定方法。所说的长裙竹荪的ITS1‑5.8S‑ITS2序列如SEQ NO.1所示；短裙竹荪的ITS1‑5.8S‑ITS2序列如SEQ NO.2所示；棒竹荪的ITS1‑5.8S‑ITS2序列如SEQ NO.3所示。鉴定时，先提取待鉴定样品的基因组，PCR扩增ITS1‑5.8S‑ITS2片段，并克隆测序，将所得序列与SEQ NO.1、SEQ NO.2、SEQ NO.3序列分别进行比较，从而判定是否为长裙竹荪、短裙竹荪或棒竹荪菌种。本发明可以对野生及人工培养的长裙竹荪菌种、短裙竹荪菌种及棒竹荪菌种进行准确的鉴定，能准确区分和判别长裙竹荪、短裙竹荪和棒竹荪菌种，为品系鉴定、品种保护、菌种质量控制、有效菌种繁育及竹荪人工栽培提供可靠技术。

技术领域

本发明涉及一种真菌品种的DNA序列及利用该序列鉴定其品种的方法，更具体地说，本发明涉及一种长裙竹荪菌种、短裙竹荪菌种和棒竹荪菌种的ITS1-5.8S-ITS2序列及利用该序列鉴定其品种的分子鉴定方法，属于分子生物学方法鉴定真菌品种技术领域。

背景技术

竹荪（Dictyophora spp.）属担子菌亚门、腹菌纲、鬼笔目、鬼笔科、竹荪属，是世界上名贵的大型食用菌之一，共12个种。我国有长裙竹荪、短裙竹荪、黄裙竹荪、朱红竹荪、红托竹荪、皱盖竹荪和棘托竹荪7个种。竹荪含有19种氨基酸、多种维生素和多种有益人体健康的微量元素。研究表明，经常食用竹荪具有抗氧化、减肥、增强免疫、保护肝脏及抗辐射减肥等作用；竹荪对降低血压、减少血液中脂肪和总胆固醇的含量也有一定的效果。此外，竹荪作为一种特殊的天然防腐剂，安全性高，抑菌效果好。竹荪可广泛用于各类食用菌终端产品与其它食品行业，经深加工的产品有竹荪保健饮料、竹荪糯米酒、竹荪多糖口服液等。

长裙竹荪（Dictyophora indusiata）、短裙竹荪（Dityophora duplicata）和棒竹荪（Dictyophora phalloidea），三者在形态上相似，其主要区别在于生长地域。随着市场需求量的增加以及竹荪栽培技术的不断进步，竹荪资源已不再是难题。但由于三者的形态特征极其相似，在选种育种、种质资源管理与保护、实验研究及竹荪产品开发等方面导致种与种之间的混淆；且因地域性的差异，其不同地域的竹荪本身的营养价值也会存在一定的差异性，若将竹荪菌种混合，则竹荪在选种繁育、种质资源管理、实验研究及竹荪产品开发等方面会受到一定的负面影响，也会直接影响到竹荪本身的利用价值和消费者的利益。因此，进行相关研究之前须对竹荪菌种做出准确的鉴定，但单纯采用形态学特征和微观解剖还不能对竹荪品种做出全面客观的鉴定。

基于DNA序列的分子标记技术，能达到准确鉴定竹荪菌种的目的。真菌核糖体DNA区段含有多个串联重复序列，每个重复序列包含18S、5.8S、28S rRNA基因及其间隔区域。其中内部间隔区ITS1-5.8S-ITS2（含5.8S）将18S和28S rRNA基因分隔开，这些区域的鉴定适合从种到属的分类鉴定，是很好的分子鉴定标记，不同种的ITS1-5.8S-ITS2序列是不相同的。以ITS1-5.8S-ITS2基因序列分析和分子探针形式应用于竹荪菌种的鉴定中，对菌种的ITS1-5.8S-ITS2序列进行测序，获得序列，就可通过对比ITS1-5.8S-ITS2序列来达到准确鉴定长裙竹荪、短裙竹荪和棒竹荪的目的。

发明内容

本发明的目的是解决现有竹荪鉴定技术存在的不足与问题，提供一种长裙竹荪、短裙竹荪和棒竹荪的ITS1-5.8S-ITS2区序列及利用该序列鉴定其品种的分子鉴定方法，用特定的DNA序列进行竹荪真菌鉴定，保证了竹荪品种及长裙竹荪、短裙竹荪菌种和棒竹荪菌种的鉴定更可靠、正确。