[发明专利]共表达H5亚型禽流感HA蛋白和传染性法氏囊VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株

说明书

本发明涉及一种共表达H5亚型禽流感HA基因和传染性法氏囊VP2基因的重组火鸡疱疹病毒疫苗株及其应用。所述共表达H5亚型禽流感HA基因和传染性法氏囊VP2基因的重组火鸡疱疹病毒疫苗株的保藏号为CCTCC NO：V201738。本发明还提供一种用于预防禽流感病毒、传染性法氏囊病毒和马立克病毒的三联疫苗，其包含有效量的所述共表达H5亚型禽流感HA基因和传染性法氏囊VP2基因的重组火鸡疱疹病毒疫苗株。

本申请要求2017年12月25日提交的发明专利申请201711428339.1的优先权。

技术领域

本发明涉及重组病毒疫苗，具体地，涉及一种共表达H5亚型禽流感HA蛋白和传染性法氏囊VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株及其应用。

背景技术

禽流感病毒(Avain influenza virus，AIV)和传染性法氏囊病毒(Infectiousbursa disease virus，IBDV)是危害我国养禽业发展的两种重要病毒性传染病，给养禽业造成严重的经济损失^[1]。目前，控制这两种传染性疾病的主要手段为疫苗的免疫接种。传统的疫苗虽然能够给家禽提供有效的保护，但同时也存在着很多的不足，如禽流感灭活疫苗的缺点是免疫原性差、副作用较多、使用剂量大^[2]；而传染性法氏囊病疫苗的缺点主要包括：弱毒活疫苗易受母源抗体的干扰；中等毒力活疫苗对法氏囊有损伤，同时还具有扩散病毒的危险；灭活疫苗不能够诱导机体产生坚强的免疫力，不能抵抗强毒株的攻击等^[3]。为了解决这些问题，近年来安全有效的重组病毒活载体疫苗成为研究的热点，如重组火鸡疱疹病毒(rHVT)疫苗等，这些疫苗具有更安全、能够在机体内持续存在、能够不受母源抗体的干扰、易于保存和运输等特点，从而弥补了传统疫苗的不足^[4-5]。

发明内容

本发明构建了一株同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白和传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT)。其目的是为研制禽流感病毒(AIV)-传染性法氏囊病毒(IBDV)-马立克病毒(MDV)三联苗提供方法。

本发明以实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(pFosA、pFosB、pFosC、pFosD和pFosE)(可参见申请号201410171477.6)为基础，首先在pFosE粘粒上利用转座子(Kan2-egfp)寻找另外一个外源基因的插入位点，然后分别将禽流感病毒的HA蛋白的编码核苷酸序列(SEQ ID NO.1)和传染性法氏囊病毒的VP2蛋白的编码核苷酸序列(SEQ ID NO.2)克隆至pCI(购自Promega)和pCAGGs^[6]载体中，获得pCI-HA和pCAGG-VP2克隆。利用Gateway LR克隆技术，将pCI-HA的表达框CMV-HA-polyA插入到pFosC上HVT第053和054基因之间，把pCAGG-VP2的表达框Pec-VP2-polyA插入到pFosE上的HVT第088和第089基因之间，从而获得了共表达HA蛋白和VP2蛋白的rHVT53-HA/88-VP2。通过细胞实验和免疫效力来评估重组病毒rHVT-53-HA/88-VP2。该重组病毒rHVT-53-HA/88-VP2共表达H5亚型禽流感HA基因和传染性法氏囊VP2基因的重组火鸡疱疹病毒疫苗株，已于2017年9月30日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉，武汉大学，邮编：430072)，保藏号为CCTCC NO：V201738。

因此，本发明提供下述技术方案：

1.一种构建共表达H5亚型禽流感HA蛋白和传染性法氏囊VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株的方法，所述方法包括将禽流感病毒的HA蛋白的编码核苷酸序列插入在粘粒pFosC中，将传染性法氏囊病毒的VP2蛋白的编码核苷酸序列插入在粘粒pFosE上，将上述两个重组粘粒与pFosA、pFosB和pFosD一起共转染次代鸡胚成纤维细胞CEF救获共表达H5亚型禽流感HA蛋白和传染性法氏囊VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗株。