[发明专利]一种用于鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹的方法

说明书

本发明提供一种用于鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹的方法，是提取待检测的青蟹样品的核酸样品，然后用PCR引物对扩增核酸样品进行基因分型；其中拟穴青蟹中对应的核苷酸片段的序列为SEQ ID NO:1：锯缘青蟹中对应的核苷酸片段的序列为SEQ ID NO:2。本发明所建立的方法能够有效的鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹，其通过高分辨率熔融曲线HRM对待检测的青蟹进行分型，从而快速、准确鉴别青蟹种质，为青蟹的育苗养殖提供技术支持。

技术领域

本发明属于分子标记辅助遗传育种技术领域，具体涉及一种用于鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹的方法。

背景技术

青蟹属(Scylla)隶属于甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapode)、短尾亚目(Brachyura)、梭子蟹科(Portunidae)。广泛分布于印度一西太平洋沿岸水域，包括东南亚、澳大利亚、日本、印度、南非等海域的红树林地区及河口内湾区，在我国主要分布于浙江、福建、台湾、广东、广西和海南沿岸水域。青蟹具有个体大、生长快、适应性强、肉味鲜美、营养丰富等特点，已成为世界性的经济养殖品种，但是随着捕捞强度的加大，海洋环境的污染，野生青蟹资源严重衰退，根据陈丕茂等人在2002-2004年各礁区拖网调查,蟹类资源密度为180.985kg·km^-2,但经济蟹类所占比例仅为26.69％，且在以往调查中出现率较高且经济价值较高的锯缘青蟹未捕到，因此青蟹的人工养殖迫在眉睫。拟穴青蟹和锯缘青蟹是我们国家常见青蟹种类，由于不同青蟹在养殖生态学、繁殖学、营养学等生理生态方面有较大差异，不同种青蟹育苗要求不同，开展青蟹属种类的鉴定研究有助于青蟹养殖技术的发展。

发明内容

本发明提供一种用于鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹的方法，以及该方法所使用的分子标记；通过本发明的方法能够有效的鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹，从而弥补现有技术的不足。

本发明的用于鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹的方法，是提取待检测的青蟹样品的核酸样品，然后用PCR引物对扩增核酸样品进行基因分型；

其中拟穴青蟹(Scylla paramamosain)中对应的核苷酸片段的序列为SEQ ID NO:1：

AATTAAAAAACTAATGATTATGCTACCTTTGCACGGTCAAAATACCGCGGCTATTTAACA-TTTTTGTCAGTGAGCAGGCTAGACTATA；

锯缘青蟹(Scylla_serrata)中对应的核苷酸片段的序列为SEQ ID NO:2：

AATTAAAAAACTAATGATTATGCTACCTTTGCACGGTCAAAATACCGCGGCTATTTAACACTTTTTGTCAGTGAGCAGGCTAGACTATA；

其中所使用的引物对，能够同时扩增上述核苷酸序列为SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2的基因片段；

作为实施例的一种具体记载，所述的引物对的上游引物的序列如下：

5′-AATTAAAAAACTAATGATTATGCTACC-3′(SEQ ID NO:3)

下游引物的序列如下：

5′-TATAGTCTAGCCTGCTCACTGACA-3′(SEQ ID NO:4)；

上述的基因分析是使用高分辨率熔解曲线方法，其中反应程序如下：95℃预变性10min，95℃变性30s，Tm退火30s，72℃30s，45个循环。

本发明所建立的方法能够有效的鉴别拟穴青蟹和锯缘青蟹，其通过高分辨率熔融曲线HRM对待检测的青蟹进行分型，从而快速、准确鉴别青蟹种质，为青蟹的育苗养殖提供技术支持。

附图说明

图1：拟穴青蟹和锯缘青蟹的外部形态图；