[发明专利]一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法

权利要求书

1.一种内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于对刺五加种子进行内生真菌Alternaria alternata浸种处理和变温层积处理，包括以下步骤：

(1)种子的获取：采集刺五加黑紫色的成熟果实，放入容器中，加入少量水，等待果实软化后，平铺在地表进行踏踩，使种肉分离，再放入容器中加水多次进行淘洗，倒出果肉以及瘪粒的种子，捞出容器底部的刺五加种子晒干待用；

(2)种子消毒：将刺五加种子用次氯酸钠水溶液浸种消毒后，用清水冲洗净，再用清水浸泡24h，使种子吸水饱和，取出后沥干水分，所述次氯酸钠的浓度为5-8％，所述次氯酸钠的浸种时间为5-15min，所述清水冲洗次数为3-5次；

(3)刺五加内生真菌浸种培养：将刺五加内生真菌Alternaria alternata接种在液体培养基上，在摇床上摇7天，取刺五加种子，用75％酒精浸泡20-40s，用无菌水冲洗3-5次，5-8％次氯酸钠处理5-15min，再用无菌水冲洗3-5次，将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中，继续摇24-48h，120rpm，随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒，用75％酒精浸泡20-40s，用无菌水冲洗3-5次，5-8％次氯酸钠处理5-15min，再用无菌水冲洗3-5次，消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里，并及时补充水分，所述刺五加种子与河沙按体积比1∶1-5混匀；

(4)取经步骤(3)处理的刺五加种子，用酒精和次氯酸钠溶液对种子进行浸泡消毒，用75％酒精浸泡20-40s，用无菌水冲洗3-5次，5-8％次氯酸钠处理5-15min，再用无菌水冲洗3-5次，再次用刺五加内生真菌Alternaria alternata悬液浸种共生3-7天，用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子进行浸泡消毒，用75％酒精浸泡20-40s，用无菌水冲洗3-5次，5-8％次氯酸钠处理5-15min，再用无菌水冲洗3-5次；

(5)种子解除休眠：将经步骤(4)处理的刺五加种子平铺于用高压锅灭菌的湿河沙中，种子与湿河沙按体积比1∶1-5混匀，装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽，保持湿度50-70％，缺水时适量浇水，水中加1％新洁尔灭，刺五加种子变温层积：第一阶段：温度保持在20-25℃，时间为10周，每日翻动一次；第二阶段：刺五加种子温度保持在10-15℃，时间为6周，2-3天翻一次；第三阶段：刺五加种子温度保持在0-5℃，时间为9周；

(6)取出经步骤(5)处理的刺五加种子，置于室温培养箱下培养。

2.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于，所述步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为10-20:1，所述淘洗次数为5-10次。

3.根据权利要求2所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于，所述步骤(1)中刺五加成熟果实与水的重量比为10:1，所述淘洗次数为10次。

4.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于，所述步骤(2)中次氯酸钠的浓度为5％，所述次氯酸钠的浸种时间为10min，所述清水冲洗次数为5次。

5.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，酒精浸泡时间为30s，使用无菌水冲洗3次，5％次氯酸按处理10min，再用无菌水冲洗5次，将经上述处理的刺五加种子放入装有内生真菌的锥形瓶中，继续摇36h，120rpm，随后用酒精和次氯酸钠溶液对浸泡后的种子再次进行浸泡消毒，用75％酒精浸泡30s，用无菌水冲洗3次，5％次氯酸钠处理10min，再用无菌水冲洗5次，消毒完毕后的刺五加种子放入经高压灭菌的河沙里，并及时补充水分，所述刺五加种子与河沙按体积比1∶2混匀。

6.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于，所述步骤(4)中使用刺五加内生真菌Alternaria alternata悬液浸种共生6天。

7.根据权利要求1所述的内生真菌促进刺五加种子发芽的方法，其特征在于，所述步骤(5)中种子与湿河沙按体积比1∶2混匀，装入木箱或大花盆中进行混沙层积催芽，保持湿度60％。