[发明专利]一种甜瓜白粉病病菌的离体保存方法

说明书

本发明属于生物病原菌保存技术领域，具体涉及一种甜瓜白粉病病菌的离体保存方法。该方法包括以下步骤：步骤1：配制培养基，然后将培养基加入到高压蒸汽灭菌后的培养皿中；步骤2：培养基凝固后，在培养基上放入1～2层吸水纸。步骤3：将感白粉病甜瓜品种的种子进行水培，待幼苗长出第1片真叶后，取幼苗的子叶，然后将消毒后的子叶平放在吸水纸上；步骤4：取白粉病病菌，对子叶进行接种。步骤5：接种后盖上培养皿盖子，并将培养皿置于温度20℃、光照度2000勒克斯、光周期（白天/黑夜）12小时/12小时环境下进行培养；步骤6：35～42天后，对所述子叶上的白粉病病菌进行转接。该方法操作非常简便，成本低，病菌保存时间较长。

技术领域

本发明属于生物病原菌保存技术领域，具体涉及一种甜瓜白粉病病菌的离体保存方法。

背景技术

甜瓜是葫芦科（Cucurbitaceae）黄瓜属（Cucumis L.）一年生蔓生草本植物。中国有着悠久的甜瓜栽培历史，也是世界上最大的甜瓜生产和消费大国。据FAO统计，2014年甜瓜种植面积达到43.89万hm²，产量占到了世界总产量的50.04%。然而，随着近年来保护地甜瓜栽培面积的扩大，甜瓜病害日趋严重。白粉病是保护地甜瓜生产中的重要病害之一，主要侵染甜瓜幼苗期和成株期的植株叶片，严重时期茎和果实上也会受到侵染。在适宜的环境条件下，白粉病发展非常迅速，几天时间即可蔓延至整个温室或瓜田，造成叶片发黄、干枯，严重影响植株的光合作用，进而影响甜瓜果实的产量和品质。

鉴于甜瓜白粉病的严重危害，其已经成为科研工作者研究的一个热点。然而，甜瓜白粉病属于专性寄生菌，无论其菌丝体还是无性阶段的分生孢子，离开活体寄主后，其生活力的维持时间都很短，因此白粉病菌必须进行活体保存。当前研究人员在进行甜瓜白粉病研究中，为了保证白粉病病菌的周年保存，通常需要不断培养感病植株幼苗，通过孢子悬浮液喷雾接种，并不断转接病菌。尽管也有报道当植株长到5片真叶时，剪取茎尖扦插到盛有苯并咪唑-甘露醇琼脂糖培养基的三角瓶中，然后在茎尖上接种保存。由于必须等到植株长至5～6叶时才能取茎尖，费时费工，成本较高，并且茎尖培养过程中容易造成污染。传统的孢子悬浮液喷雾接种保存方法，必须进行育苗，等到植株长到3～4片真叶时进行接种，并且植株发病后叶片很快变黄、干枯，不仅育苗成本高，保存时间也短。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种甜瓜白粉病病菌的离体保存方法，该方法通过子叶离体接种，大大缩短了前期甜瓜幼苗的培养时间，操作简便，成本低；同时由于种子萌发后大部分营养贮存在子叶中，因此与真叶相比，用子叶接种病菌保存时间更长；另外，子叶与培养基间有吸水纸的隔离，降低了污染的几率。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种甜瓜白粉病病菌的离体保存方法，包括以下步骤：

步骤1：配制培养基：每1000毫升无菌水中加入8克琼脂、6.8克蔗糖、18.2克甘露醇和 400微升质量分数25%的那他霉素溶液；然后将培养基加入到高压蒸汽灭菌后的培养皿中。

步骤2：培养基凝固后，在培养基上放1～2层高压蒸汽灭菌后的吸水纸。

步骤3：将感白粉病甜瓜品种的种子进行水培，待幼苗长出第1片真叶后，在超净工作台上取幼苗的子叶，将子叶在体积百分数75%的酒精中浸泡3秒钟后用无菌水冲洗3次，然后将子叶平放在培养皿中，所述子叶的下表面向下。

所述水培包括以下步骤：

将感白粉病甜瓜品种的种子在55℃温水中浸种3～4小时，然后放入铺有润湿滤纸的培养皿中，并盖上培养皿盖子；

将培养皿放在温度28～30℃的黑暗环境下培养18～24小时进行催芽；