[发明专利]一种食用百合种质资源的分子鉴别方法

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，涉及一种物种分子标记鉴定，具体是一种食用百合种质资源的分子鉴别方法。本发明鉴别能力强，鉴定过程简单，鉴定结果可靠的特点，首先通过琼脂糖凝胶电泳确定引物PCR产物的稳定性及其最佳退火温度，其次，利用丙烯酰胺凝胶电泳获得该引物PCR产物的清晰电泳图谱，最后，详尽分析电泳图谱，汇总引物的多态信息并标记特征位点。根据引物信息进行评估和选择，可对参试物种进行遗传图谱构建、多样性评价和种质鉴定等多项遗传分析。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，涉及一种物种分子标记鉴定，具体是一种食用百合种质资源的分子鉴别方法。

背景技术

食用百合是野生百合经过多年驯化、品种筛选以及人工栽培后，获得可食用的百合品种，其药食两用的特点，使其成为一种营养价值较高的经济作物。目前，国内可食用的百合品种约有10种，其中栽培面积大，商品化程度高，市面上热销的食用百合品种分为：兰州百合、龙牙百合、宜兴百合（卷丹）和岷江百合。食用百合生长成为商品，需在田间生长需要3-7年，具有较高的经济价值，因此，在市场经济利益的驱动下，已经出现商家混淆品种的现象。此外，百合食品加工趋向的多元化，百合干，百合粉等诸多形态的商品出现，以往通过外形、味道鉴别的方法已经不能胜任，例如宜兴百合（卷丹）的干状物为国家指定中药材，而兰州百合和龙牙百合的干状物在外形上与宜兴百合（卷丹）的干状物基本相同，难以辨别，虽然国家药典规定了宜兴百合（卷丹）的鉴别方法，但该方法存在一定缺陷，不能鉴别混样。鉴于目前食用百合市场存在的现状，对我国主要食用百合品种进行分子标识，解决食用百合商品中违规互掺难以鉴别的技术问题，符合现代食品安全策略，对维护食用百合市场秩序和安全，具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种食用百合种质资源的分子鉴别方法，该方法可对主要食用百合品种进行分子标识和鉴别，可鉴定微量痕迹，尤其适用于鉴定混合样本。此外，该方法使用分子实验的基础仪器，检测结果准确，是一种简单、可靠的分子鉴别方法。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方法为：

一种百合种质资源的分子鉴别方法，包括如下步骤：

a、提取百合待测样品DNA；

b、以百合待测样品DNA为模板，利用特定引物进行PCR扩增，特定引物F为TAAGTATGTCCAGCCCGGAG，R为GTGGGTCCCTTCAGGGTTT；

c、利用聚丙烯酰胺凝胶电泳，对PCR产物进行显现，形成电泳图谱；

d、电泳结果用凝胶成像仪观察、拍照、记录与分析，识别电泳图谱中的特异性条带，鉴别百合种质。

所述步骤a中百合采用试剂盒提取，取百合样本置于研钵中，加入液氮研磨成粉状组织，粉状组织装于离心管中，按照DNA提取试剂盒提供的试剂及步骤进行基因组提取，最终获得的基因组用双蒸水ddH₂O溶解，置于-25℃环境中进行保存。

所述步骤b中PCR扩增为： 2×Taq PCR Master Mix 10μL、引物1.6μL、百合待测样品DNA模板1.0μL，去离子水6.0μL。

所述步骤b中PCR扩增步骤： 94℃预变性5min，进行循环反应94℃变性45s、57℃退火45s、72℃延伸反应1min，反复35个循环，在72℃延伸10min。

所述步骤a中待测样品DNA模板为百合鲜样、百合干或百合粉。

所述步骤c中用TBE缓冲液配置质量浓度8%的聚丙烯酰胺凝胶， PCR 扩增产物点样8μL，以DNA Marker DL500做分子量标记，电压180-220V，电泳处理时间60-90min。