[发明专利]基于POSS的星型多重靶向功能性基因载体及应用

权利要求书

1.基于POSS的星型多重靶向功能性基因载体的制备方法，其特征是包括如下步骤：

（1）将八氨基POSS溶解于高纯水中，第一次加入NaOH水溶液，得到溶液一，所述八氨基POSS与第一次加入的NaOH水溶液中NaOH的摩尔比为1:（4-9）；将2-溴异丁酰溴溶解于二氯甲烷或三氯甲烷中，得到2-溴异丁酰溴溶液；向溶液一中加入2-溴异丁酰溴溶液的同时，第二次加入NaOH水溶液，在0-5℃，在搅拌下反应10-18小时，得到大分子引发剂POSS-(Br)n，n为4-8的粗品，精制，得到大分子引发剂POSS-(Br)n，n为4-8；所述八氨基POSS、2-溴异丁酰溴和第二次加入NaOH水溶液的NaOH的摩尔比为1:（8-24）:（8-48）；

所述八氨基POSS为八氨基笼状聚倍半硅氧烷的简称；

（2）将步骤（1）获得的产物和DMAEMA加入聚合管并溶解在甲醇中，再加入配体HMTETA，密封后在液氮冷却下，将聚合管抽真空通氮气的操作重复3-5次，然后在氮气氛围下加入CuBr，在50-70℃下反应16-28小时；将反应产物过中性氧化铝柱，然后旋转蒸发得到浓缩液：将浓缩液在正己烷中反复沉淀2-3次，再用真空干燥箱在20-37℃下干燥至恒重；

步骤（1）获得的产物、DMAEMA、HMTETA和CuBr的摩尔比为1:（200-400）:（8-16）：（4-8）；

DMAEMA是甲基丙烯酸二甲氨基乙酯简称；

HMTETA是1,1,4,7,10,10-六甲基三亚乙基四胺简称；

（3）将步骤（2）获得的产物和分子量为360-600 kDa的PEGMA加入聚合管并溶解在甲醇中，再加入配体HMTETA；密封后在液氮冷却下,将聚合管抽真空通氮气的操作重复3-5次，然后在氮气氛围下加入CuBr，在50-70℃下反应16-28小时；将反应产物过中性氧化铝柱，然后旋转蒸发得到浓缩液：将浓缩液在正己烷中反复沉淀2-3次，再用真空干燥箱在20-37℃下干燥至恒重，得到聚合物POSS-PDMAEMA-PPEGMA，简称PPP；

步骤（2）获得的产物、所述PEGMA、HMTETA和CuBr的摩尔比为1:（56-80）:（8-16）:（4-8）；

PEGMA为聚乙二醇甲基丙烯酸酯的简称；

（4）将PPP溶解于二甲基亚砜中，配制成浓度为3-5mg/mL的溶液为溶液二，将三乙胺和溶液二加入到干燥的反应容器中；在0-5℃，再滴入体积浓度为7%-10%的丙烯酰氯二甲基亚砜溶液，反应10-18小时，过滤，用截留分子量为3000-10000的透析袋透析提纯，冻干，得到末端双键化的聚合物POSS-PDMAEMA-PPEGMA-DAs，简称PPP-DAs；

三乙胺、溶液二和所述丙烯酰氯二甲基亚砜溶液的体积比为1:（10-15）:（10-15）；

（5）将PPP-DAs与多肽的摩尔比为1：（8-32）的比例，将PPP-DAs与多肽溶于高纯水中，并使多肽的浓度3-5mg/mL的溶液为溶液三，超声处理10-20分钟；加入溶液三体积0.2-0.4倍的浓度为2-4mg/mL的DMPA的二甲亚砜溶液，在通氮气的条件下，用紫外灯连续照射10-15分钟；收集反应物并通过截留分子量为3000-5000的透析袋透析提纯，冷冻干燥得到基于POSS的星型多重靶向功能性基因载体即聚合物POSS-PDMAEMA-PPEGMA-PEP简称为PPP-PEP，所述PEP为多肽的简称；

DMPA为2,2-二甲氧基-2-苯基苯乙酮的简称；

所述多肽为CAG-TAT-NLS；所述CAG-TAT-NLS的氨基酸序列用SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1的方法制备的基于POSS的星型多重靶向功能性基因载体。

3.权利要求2的基于POSS的星型多重靶向功能性基因载体在制备基因递送药物的应用。