[发明专利]一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法

权利要求书

1.一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法，其特征在于，该方法以荞麦为原料，通过常温浸泡、加水打浆、高压均质制备荞麦匀浆液，联合耐高温α-淀粉酶处理，获得以荞麦为底物的发酵培养基；采用酶法制备大豆蛋白酶解产物，作为补充氮源添加至所述发酵培养基中，灭菌后，接种纳豆菌，控制液态发酵条件，制备具有高纳豆激酶活性、富含谷物多酚且具有强抗氧化活性的发酵产物，具体包括如下步骤：

(1)常温浸泡：取干荞麦，加入水，常温浸泡后沥干多余水分，得湿荞麦；

(2)加水打浆、高压均质：取步骤(1)所得湿荞麦，加入水，高速剪切后过胶体磨，再进行高压均质，得到荞麦匀浆液；

(3)耐高温α-淀粉酶处理：加热步骤(2)所得荞麦匀浆液后，加入耐高温α-淀粉酶，高温酶解结束后，再次加入水，匀速搅拌，获得以荞麦为底物的发酵培养基；

(4)大豆蛋白酶解产物的制备：取大豆分离蛋白，加入水，匀速搅拌后，调节pH值，再加入蛋白酶进行酶解，灭酶，离心分离，取上清液，减压浓缩后，喷雾干燥得大豆蛋白酶解产物；

(5)发酵培养基的制备：在步骤(3)得到的以荞麦为底物的发酵培养基中加入步骤(4)所得大豆蛋白酶解产物，匀速搅拌，调节pH值，灭菌，得到发酵培养基；

(6)液态发酵：取试管斜面上保藏的纳豆菌，接种于种子培养基中，活化后，将所得种子液接种于步骤(5)所得发酵培养基中，进行摇瓶预培养后，将摇瓶预培养后的菌体接种到装有步骤(4)所得发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养，发酵结束后，离心分离，上清液即为发酵产物。

2.根据权利要求1所述的一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述干荞麦与水的料液比为1:6～8g/mL；浸泡的时间为6～8小时。

3.根据权利要求1所述的一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述湿荞麦与水的料液比为1:4～6g/mL；所述高速剪切是在8000～10000rpm的速率下剪切5～9min；所述过胶体磨的次数为2～3次；所述高压均质的压力为20～40MPa，高压均质的次数为2～4次。

4.根据权利要求1所述的一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述加热的条件为80～90℃加热2～4小时；所述耐高温α-淀粉酶的加入量为干荞麦质量的0.8～1.2％；所述高温酶解是在80～90℃酶解40～60min；高温酶解结束后，按湿荞麦与水的料液比为1:4～6g/mL，再次加入水；所述匀速搅拌是在室温下200～400r/min搅拌1～2小时。

5.根据权利要求1所述的一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法，其特征在于，步骤(4)中，大豆分离蛋白与水的料液比为1:10～14g/mL；所述匀速搅拌为室温下200～400r/min转速搅拌4～6小时；调节pH值至7.0～8.0；所述蛋白酶的加入量为大豆分离蛋白质量的2～4％；所述蛋白酶为胰酶和碱性蛋白酶，胰酶的加入量占蛋白酶量的20～40％，碱性蛋白酶的加入量占蛋白酶量的60～80％；所述酶解是在50～56℃下酶解10～14小时；所述灭酶是在90～96℃下灭酶20～30min；所述离心分离是6000～8000g离心20～30min；所述减压浓缩为浓缩至固形物含量为30～40wt％。

6.根据权利要求1所述的一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法，其特征在于，步骤(5)中，所述大豆蛋白酶解产物与以荞麦为底物的发酵培养基的料液比为1:3～5g/L，所述匀速搅拌为室温下200～400r/min搅拌1～2小时；调节pH值至7.0～7.2；所述灭菌为118～122℃下灭菌20～30min。

7.根据权利要求1所述的一种提高发酵产物中纳豆激酶及抗氧化物质产量的方法，其特征在于，步骤(6)中，所述种子培养基中胰蛋白胨占1～3wt％，酵母粉占0.5～1wt％，NaCl占1～2wt％，其余为水，pH为7.0～7.4。