[发明专利]用于流式细胞仪的全自动荧光补偿方法

说明书

本发明公开了一种用于流式细胞仪的全自动荧光补偿方法，包括以下步骤：步骤1)制备多色样品上机测试，得到原始荧光信号结果；步骤2)保持电压增益与步骤1)中的相同，各单色小球和空白小球按比例混合上机测试，得到各单色小球和空白小球的子集在各个检测通道的荧光信号原始输出值；步骤3)计算荧光泄漏矩阵K和自发荧光矩阵A；步骤4)计算荧光补偿矩阵K_C；步骤5)进行全自动荧光补偿，得到荧光补偿后的检测结果。本发明利用混合小球，只需测试一次即可得到补偿结果，而不需要多次测试阴性对照样本和各单阳性样本，简化了操作，缩短了时间，消除了实验间的误差；本发明还公开了荧光泄漏矩阵K的具体计算方法，本发明方法简便、效果显著。

技术领域

本发明涉及流式数据分析领域，特别涉及一种用于流式细胞仪的全自动荧光补偿方法。

背景技术

在进行流式细胞分析的时候，待测样本通常携带两种或两种以上的荧光素，如藻红蛋白(PE)、异硫氰荧光素(FITC)、叶丝素蛋白(PerCP)等。荧光素经过激光激发以后发射出不同波长的荧光。理论上来讲，通过选择合适的分光组件可以将不同的荧光分开，使得每个探测器只接收一种荧光信号，而不会检测到其他的荧光信号。然而实际上，目前常用的荧光染料的激发波长或发射波长都是正态或者偏态分布，有很宽的范围，因此尽管他们的发射峰值各不一样，但是发射谱常有重叠，如图1所示，为FITC、PE的发射波长，可以看出两者的波谱有重叠的现象，因而PE探测器能检测到由FITC发射的525nm左右波长的光信号。同样，FITC探测器也能检测到PE的信号，只不过每种荧光探测器检测到的荧光信号以一种荧光素为主。这样就直接影响了检测结果的准确性，因此，多色分析时必须进行光谱重叠的校正，即进行荧光补偿。

现有流式细胞仪一般采用手动补偿的方法来实现。手动补偿对于两色和三色分析可以很好地完成补偿功能，但是对于四色及四色以上的分析操作难度太大而导致几乎不可能实现。而流式细胞仪提供的自动补偿方法需要制备阴性对照样本以及所有单阳性对照样本，对样品需求量大，样品制备繁琐，样品检测次数多，导致实施难度高。并且由于多次检测间的误差，导致补偿效果往往并不好。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种用于流式细胞仪的全自动荧光补偿方法。

本发明提供的方法，不需要制备大量的荧光补偿对照样本，且一次上样就可以得到补偿结果，方法简便有效。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于流式细胞仪的全自动荧光补偿方法，包括以下步骤：

步骤1)制备多色样品上机测试，得到理想的原始荧光信号结果；

步骤2)保持电压增益与步骤1)中的相同，各单色小球和空白小球按比例混合上机测试，得到各单色小球和空白小球的子集在各个检测通道的荧光信号原始输出值；

步骤3)根据步骤2)的检测结果，计算荧光泄漏矩阵K和自发荧光矩阵A；

步骤4)计算荧光补偿矩阵K_c；

步骤5)根据补偿公式S，进行全自动荧光补偿，得到荧光补偿后的检测结果。

优选的是，在所述步骤3)中，根据步骤2)所得的检测结果，设门得到空白小球以及各单色小球的子集；

通过计算各检测通道之间的泄漏系数k_ij，从而得到自发荧光矩阵A和泄漏矩阵K：

A＝[a₁ a₂ a₃ … a_n]^T；

其中，i＝1,…n；j＝1,…n；n为总检测通道数；