[发明专利]适于家蚕丝腺表达的改造人乳铁蛋白基因及其表达系统和应用有效
| 申请号： | 201810214261.1 | 申请日： | 2018-03-15 |
| 公开（公告）号： | CN108486123B | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 夏庆友;王峰;许胜;王元成;王日远;陈文静;赵萍 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;C12N15/65 |
| 代理公司： | 重庆航图知识产权代理事务所(普通合伙) 50247 | 代理人： | 王贵君 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 适于 家蚕 表达 改造 铁蛋白 基因 及其 系统 应用 | ||
1.适于家蚕丝腺表达的改造人乳铁蛋白基因，其特征在于：所述改造人乳铁蛋白基因如SEQ ID NO.1所示。
2.含有权利要求1所述适于家蚕丝腺表达的改造人乳铁蛋白基因的表达载体。
3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体含有顺序连接的增强子hr3，分泌型丝胶1基因启动子、改造人乳铁蛋白基因和丝胶1基因的终止子。
4.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体还含有荧光筛选标记基因表达框，所述荧光筛选标记基因表达框位于所述增强子hr3上游。
5.权利要求3或4所述表达载体在家蚕丝腺中表达重组人乳铁蛋白中的应用。
6.利用权利要求3或4所述表达载体在家蚕丝腺中表达重组人乳铁蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述表达载体转化解除滞育家蚕蚕卵，用无毒胶水封口后经甲醛蒸汽消毒，孵化，筛选转基因阳性蛾圈，取阳性转基因家蚕茧壳，在液氮中粉碎成粉末，然后溶解于含50mM Tris-Cl、8M Urea、pH 8.0的缓冲液中，80℃水浴40min，离心收集上清，经纯化，得重组人乳铁蛋白。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：茧壳粉末溶解于缓冲液中茧壳粉末的浓度为20mg/mL。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述纯化的具体方法为：将上清液过HisTrapTM FF crude亲和层析柱，用咪唑浓度为0~500mM的咪唑洗脱液洗脱，咪唑洗脱液用pH7.0-7.5、浓度为8M Urea溶液配制，收集洗脱液，洗脱液即为纯化后的重组人乳铁蛋白。
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