[发明专利]关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在人工关节感染的检测及诊断试剂盒中的应用

权利要求书

1.一种定量检测关节液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的免疫荧光试纸条，所述试纸条包括反应膜(1)、样品垫(2)、吸收垫(3)和底板(4)；所述反应膜(1)位于所述底板(4)上，所述反应膜(1)上固定有检测带(5)和质控带(6)，所述样品垫(2)与所述反应膜(1)的一侧部分重叠并位于所述反应膜(1)和所述底板(4)上，所述吸收垫(3)与所述反应膜(1)的另一侧部分重叠并位于所述反应膜(1)和所述底板(4)上，所述样品垫(2)上包括加样点(7)；其中所述检测带包被有荧光颗粒标记的抗NGAL抗体，所述质控带包被有羊抗鼠IgG抗体。

2.如权利要求1所述的免疫荧光试纸条，所述底板(4)的材料选自ABS、PS、PE、PVC或PC中的任意一种；所述样品垫(2)或吸收垫(3)的材料选自纤维素、玻璃纤维或纺织聚合物中的任意一种；所述反应膜(1)的材料选自硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、尼龙膜或聚四氟乙烯膜中的任意一种。

3.如权利要求1所述的免疫荧光试纸条，所述抗NGAL抗体的终浓度为0.5～2.0mg/mL(优选1.0mg/mL)，包被量为0.5～2μL/cm(优选1μL/cm)；所述羊抗鼠IgG抗体的终浓度为0.5～2.0mg/mL(优选1.0mg/mL)，包被量为0.5～2μL/cm(优选1μL/cm)。

4.如权利要求1所述的免疫荧光试纸条，所述检测带(5)与质控带(6)之间的距离为约1.0～10mm(优选5.0mm)，所述检测带(5)与质控带(6)的宽度为约0.5～2.0mm(优选0.8～1.0mm)；所述反应膜(1)和样品垫(2)的连接处重叠1～2mm；所述反应膜(1)和吸收垫(3)的连接处重叠1～2mm。

5.一种如权利要求1所述的免疫荧光试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1)抗体的制备：采用基因工程方法制备抗NGAL抗体、羊抗鼠IgG抗体；采用荧光颗粒标记抗NGAL抗体；用含BSA的PBS稀释荧光颗粒标记的抗NGAL抗体至合适的浓度；再用同样的溶液稀释羊抗鼠IgG抗体至合适的浓度；

2)包被反应膜(1)的制备：采用喷膜机分别在反应膜(1)上喷印检测带(5)与质控带(6)，检测带(5)与质控带(6)之间保留合适的距离，检测带(5)与质控带(6)保留合适的宽度；抗NGAL抗体或羊抗鼠IgG抗体的包被量适合反应膜(1)；喷印完成后，干燥备用；

3)样品垫(2)的制备：用含BSA的PBS液浸泡样品垫(2)，处理后，干燥备用；

4)免疫荧光试纸条的制备：先将反应膜(1)粘附在底板(4)的中间位置上，在反应膜(1)的一侧粘附吸收垫(3)，反应膜(1)和吸收垫(3)的连接处重叠一部分；在反应膜(1)的另一侧粘附样品垫(2)，反应膜(1)和样品垫(2)的连接处重叠一部分；再将粘贴好反应膜(1)、样品垫(2)和吸收垫(3)的底板(4)裁切成合适宽度的细条。

6.如权利要求5所述的制备方法，所述步骤1)中用含1～10％(优选5％)BSA的1～20mM(优选10mM)PBS稀释荧光颗粒标记的抗NGAL抗体，使其终浓度为0.5～2.0mg/mL(优选1.0mg/mL)；用同样的溶液稀释羊抗鼠IgG抗体，使其终浓度为0.5～2.0mg/mL(优选1.0mg/mL)。

7.如权利要求5所述的制备方法，所述步骤2)中检测带(5)与质控带(6)之间的距离约1.0～10mm(优选5.0mm)，检测带(5)与质控带(6)的宽度约0.5～2.0mm(优选0.8～1.0mm)；抗NGAL抗体或羊抗鼠IgG抗体的包被量分别为0.5～2μL/cm(优选1μL/cm)。

8.如权利要求5所述的制备方法，所述步骤3)中用含1～10％(优选5％)BSA的1～20mM(优选10mM)PBS液浸泡样品垫(2)；和/或，反应膜(1)和样品垫(2)的连接处重叠1～2mm；反应膜(1)和吸收垫(3)的连接处重叠1～2mm。

9.关节液NGAL或抗NGAL抗体在制备用于诊断人工关节感染的试剂或试剂盒中的用途。