[发明专利]一种准确鉴定金钱鱼遗传性别的特异分子标记及其引物

权利要求书

1.一种金钱鱼遗传性别的特异分子标记的检测试剂在检测金钱鱼性别中的应用，其特征在于，所述分子标记为：X染色体上DNA片段核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Y染色体上DNA片段核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一对能够PCR扩增权利要求1所述特异分子标记的引物，其特征在于，其正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

3.权利要求2所述引物在鉴定金钱鱼遗传性别中的应用。

4.权利要求2所述引物在制备鉴定金钱鱼性别试剂盒中的应用。

5.一种鉴定金钱鱼遗传性别的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测样本基因组DNA；

S2.设计引物并以S1的基因组DNA为模板，PCR扩增权利要求1所述特异分子标记；

S3.将S2的PCR扩增产进行测序；

S4.分析测序结果，根据测序结果判断金钱鱼遗传性别，判断标准为：如果特异分子标记的第151位点的核苷酸为G的单峰，和/或第166位点的核苷酸为G的单峰，则待测样本为雌鱼；

如果特异分子标记的第151位点的核苷酸为G和C的双峰，和/或第166位点的核苷酸为G和A的双峰，则待测样本为雄鱼。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系为2×PCR mix Buffer 5μL，10μmol/L正反向引物各1μL，基因组DNA 2μL，ddH2O 21μL，共50μL。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，PCR扩增的程序：95℃10min；95℃30s、60℃30s、72℃60s，37个循环；72℃10min延伸。

8.一种鉴定金钱鱼遗传性别的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求2所述引物。