[发明专利]一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的方法

说明书

本发明公开了一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的方法，属于药物化学技术领域。本发明先经果胶酶催化斯替夫苷生成甜菊醇单葡萄糖酯，收集甜菊醇单葡萄糖酯粗品后，采用了重复结晶的方法制备具有晶型A形式的甜菊醇单葡萄糖酯晶体，既可以在制备甜菊醇单葡萄糖酯的过程中获取高纯度的甜菊醇单葡萄糖酯又可以稳定地获得目标晶型，该方法所选试剂低毒环保，具有工艺简单、可操作性强，晶体结晶度高、稳定性好等优点。

技术领域

本发明涉及一种制备甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的方法，属于药物化学技术 领域。

背景技术

甜菊醇单葡萄糖酯(13-hydroxy ent-kaur-16-en-19-oic acid-β-D-glucopyranosyl ester，steviol mono-glucosyl ester,SteE)，其结构式如下式Ⅰ所示：

甜菊醇单葡萄糖酯在甜叶菊中的含量很低，因而直接从甜叶菊中提取在经济上并不可取。 目前有关合成甜菊醇单葡萄糖酯的报道中，甜菊醇单葡萄糖酯的产率基本在10％以内。例如， Yutaka等在发酵罐中使用Eucalyptusperriniana细胞混悬溶液对甜菊醇进行转糖基反应，主要产 物为甜茶苷(rubusoside，Ru)，而副产物甜菊醇单葡萄糖酯的生物转化率仅为9.7％。Nakano等发 现用来自于Aspergillus niger酶制剂Rhozyme HP150可以将29.4％的悬钩子苷分解成质量比为9:1 的甜菊醇和甜菊醇单葡萄糖酯，甜菊醇单葡萄糖酯的产率约为6.86％。而Chaturvedula等以甜菊 醇为原料三步反应(第一步乙酰化保护羟基,第二步和乙酰溴-α-D-葡萄糖酯化，第三步使用三乙 胺脱乙酰化)合成出了甜菊醇单葡萄糖酯。生物转化法合成甜菊醇单葡萄糖酯的主要问题是产量 太低，分离纯化复杂，化学法虽然可以直接获取甜菊醇单葡萄糖酯但甜菊醇高昂的成本和最终 产物的得率都将影响方法的实用性。

在晶体的制备中不同方法会产生不同的晶型，也可能导致其形态、稳定性、吸湿性和溶解 性存在差异，从而影响储存条件、口感和感官评定。而目前大多数化合物晶体都是通过溶液生 长法制备，在制备过程中倘若降温速度快，溶液迅速进入低温环境，溶液四周受热不均匀，内 外温度梯度越大，晶体生长速度越慢，在这过程中容易生成极细小的晶体(或处于无定形态)； 溶液若慢速降温，则形成的晶体一般比较粗大，晶面由下向上推进的速度慢，溶液中溶质迁移 时间充足，所以一般溶液中会出现少量结晶，继续降温结晶生长，得到颗粒大的晶体。而重复 结晶能够改变晶体形态和大小分布、强化结晶、提高非晶相冷却浓缩液的玻璃化转变温度，这 些都对晶体的稳定性、纯度、生物利用度、溶解性等有着重要的影响。

目前，不少甜菊糖苷的晶型制备已被报道并且获得专利授权，例如甜菊糖A苷的晶型就有 多个专利报道，如专利US20070292582A1、WO2010118218A1、CN103739639A和CN103739640A 等。此外，还有专利CN105669794A和CN105646616A分别报道了甜菊糖B苷晶型G和其钠盐晶 型A，专利CN105669795A报道了甜菊糖C苷晶型V，专利CN105037458A报道了甜菊糖D苷晶型 A。这些晶型均表现出结晶度高、溶解性好和稳定性高等优点，但未见有关甜菊醇单葡萄糖酯 晶型的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种甜菊醇单葡萄糖酯及其晶型A形式晶体的制备方法，采用 重复结晶的方法既可以在制备甜菊醇单葡萄糖酯的过程中获取高纯度的甜菊醇单葡萄糖酯又 可以稳定地获得目标晶型，该方法具有工艺简单、可操作性强，晶体结晶度高、稳定性好等 优点。

本发明所述制备甜菊醇单葡萄糖酯晶型A形式晶体的方法，包括以下步骤：

(1)以斯替夫苷为底物用水或缓冲液配制成10-20g/L的反应液，