[发明专利]一种从土壤中直接提取微生物菌种制备碳酸钙的方法

说明书

本发明属于微生物固化，特别涉及一种从土壤中直接提取微生物菌种制备碳酸钙的方法，包括以下步骤：步骤1，从有机质含量高的土壤中提取并分离出芽孢杆菌类菌种；步骤2，对步骤1分离出来的芽孢杆菌类菌种进行繁殖培养；步骤3，将步骤2得到的芽孢杆菌类菌液和胶凝液等体积混合，置于30℃恒温气浴培养箱中养护一段时间后，对混合液进行过滤，得到微生物诱导碳酸钙沉淀；本发明从土壤中直接提取微生物菌种制备碳酸钙，选择尿素和硫酸镍作为分离芽孢杆菌类菌种的固体选择培养基，分离效率高，将分离出的芽孢杆菌类菌种与胶凝液混合，适当条件下进行养护后，得到微生物诱导碳酸钙沉淀；该方法经济环保，操作简易且碳酸钙产率高。

技术领域

本发明属于微生物固化，特别涉及一种从土壤中直接提取微生物菌种制备碳酸钙的方法。

背景技术

生物矿化作用是一种很普遍的自然现象，几乎每一种生物都能合成矿物。其中近三分之二是钙矿，并且相当一部分具有胶结功能。它们通过其自身的生命活动，与周围环境介质之间不断发生着酶化作用，逐渐形成碳酸钙。近年来，随着土体中微生物的研究发展，土中已经存在的微生物的生命活动(主要是获取能量和碳的活动)的产物为工程所用的可能性在概念上已经取得了广泛的认可。在这样的大环境下，微生物固化技术应运而生。

所谓微生物固化就是利用土中微生物的生命活动生成的代谢产物处理砂土等散装或软弱材料，以满足工程需要。与传统的加固技术相比，微生物固化技术的过程中生物能代替了机械能，微生物新陈代谢的产物代替了化学制品，具有清洁环保、耗能低、对土体扰动小，处理均匀等优点，十分契合可持续发展的战略目标。

中国专利CN201610828703.2公开了一种利用微生物制备碳酸钙固化砂土的方法，将砂子倒入瓶中，使其均匀覆盖瓶底，然后倒入胶凝液与培养好的菌液，恒温震荡培养，之后每天定量吸取瓶中部分混合液，再添加等量的胶凝液、均匀加入少量砂子，最后持续数天后得到固化好的砂柱；但该方法的菌种的选育通常需要消耗很多的人力物力，且碳酸钙产率有待进一步提高。

发明内容

本发明解决现有技术中存在的上述技术问题，提供一种从土壤中直接提取微生物菌种制备碳酸钙的方法。

为解决上述问题，本发明的技术方案如下：

一种从土壤中直接提取微生物菌种制备碳酸钙的方法，包括以下步骤：

步骤1，从有机质含量20-30g/kg的土壤中提取并分离出芽孢杆菌类菌种；分离芽孢杆菌类菌种的固体选择培养基为尿素和硫酸镍；

步骤2，对步骤1分离出来的芽孢杆菌类菌种进行繁殖培养，采用分光光度计600nm波长测量得到芽孢杆菌类菌液的吸光度值为1.2-1.6；

步骤3，将步骤2得到的芽孢杆菌类菌液和胶凝液等体积混合，置于30℃恒温气浴培养箱中养护一段时间后，对混合液进行过滤，得到微生物诱导碳酸钙沉淀；所述胶凝液由尿素、醋酸钙和水组成，所述凝胶液中尿素的摩尔浓度为0.5-1.0mol/L，醋酸钙的摩尔浓度为0.5-1.0mol/L。

优选地，步骤1所述土壤采集自深度5-30cm内的土样，土样的保存方法为：放入灭菌的样品袋内密封保存于4℃冰箱内。

优选地，步骤1所述提取并分离出芽孢杆菌类菌种的具体方法为：

a)称取土样5g，在超净工作台内将称量好的土样倒入90ml无菌水中，充分震荡使土样呈悬液状，置室温下静置4小时，即为10^-1稀释液；