[发明专利]用于检测空间环境中的真菌的引物组合、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及用于检测空间环境中的真菌的引物组合、试剂盒及方法。本发明所述引物组合包括引物F3、B3、FIP和BIP，其中，引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。本发明所述引物组合、试剂盒以及检测方法能够同时对空间环境中常见的多种真菌进行LAMP检测，具有检测范围广、特异性好、灵敏度高、检测周期短、不存在二次污染等优点，特别适合在空间中进行在轨实时检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及用于检测空间环境中的真菌的引物组合、试剂盒及方法。

背景技术

虽然对空间设施中的微生物浓度有严格的规定，但在轨空间站例如和平号空间站和国际空间站的调查表明，微生物在这些设施中是普遍存在的。Aspergillus niger、Ulocladium botrytis和Cladosporium herbarum等真菌种属的孢子广泛存在于在轨和平号空间站。这些环境中的微生物对宇航员健康有潜在的影响。特别是，过量存在的真菌可能会导致过敏，霉菌毒素中毒症，或严重的真菌病。与此同时，研究表明造成航天器设备故障的主要微生物也是是真菌。

鉴于此，快速和高度敏感的真菌监测技术在评估太空设施和相关环境的污染方面是必不可少的。

目前，NASA制定的真菌检测方法是基于培养的方法。这种方法费时费力，且易造成二次生物污染。此外，大多数的气溶胶病原体是一种活的非可培养状态，不能用培养方法检测。而基于PCR的方法无需培养，因此可以用于替代基于培养的真菌检测方法。其中，qPCR(quantitative PCR)是一种非常有效的定量监测地球上真菌的方法，但将这种技术应用于空间环境，例如在轨空间站的检测需要进一步改进简单性、灵敏度、定量能力和成本效益。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种引物组合，其包括引物F3、B3、FIP和BIP，所述引物组合为与环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)配套使用的引物组合，能够通过LAMP技术、优选通过qLAMP技术，对空间环境中常见的多种真菌同时进行检测，具有检测范围广、特异性好、灵敏度高、检测周期短、不存在二次污染等优点，特别适合在太空中进行在轨检测。

本发明的第二目的在于提供一种试剂盒，将前述引物组合和辅助检测试剂集成于同一试剂盒，具有使用方便的优点。

本发明的第三目的在于提供一种检测空间环境中的真菌的方法，所述方法使用前述引物组合或前述试剂盒进行LAMP试验，能够对空间环境中常见的多种真菌同时进行检测，具有检测范围广、特异性好、灵敏度高、检测周期短、不存在二次污染等优点，特别适合在太空中进行在轨检测。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种引物组合，包括引物F3、B3、FIP和BIP，其中，引物F3的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

在付出大量创造性劳动后，本发明获得前述引物组合。本发明所述引物组合为特异性针对空间环境(如在轨空间站)中常见真菌的LAMP引物，其能够通过LAMP检测方法对空间环境中的多种真菌进行广谱、灵敏而特异的检测，为在空间环境下实地快速、准确地检测真菌提供可能。