[发明专利]通过血液中miR-124-3p和GATA3-AS1联合检测胃癌的试剂盒

说明书

本发明公开了一种通过血液中miR‑124‑3p和GATA3‑AS1联合检测胃癌的试剂盒，属于生物检测领域。本发明试剂盒包括扩增miR‑124‑3p、GATA3‑AS1和内参U6的上下游引物，这些引物序列如SEQ ID NO.1‑6所示。利用本发明试剂盒，通过实时荧光定量PCR检测待测者血清中has‑miR‑124‑3p与GATA3‑AS1的相对表达量，若待测者血清中has‑miR‑124‑3p相对表达量与正常人之比低于0.56，且GATA3‑AS1相对表达量与正常人之比高于1.56，则待测者患有胃癌的可能性高于90％。本发明对胃癌进行检测，具有灵敏度高、准确性高且操作简单等优点。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，提供了一种通过血液中miR-124-3p和GATA3-AS1联合检测胃癌的试剂盒。

背景技术

胃癌是发生于消化系统中最常见的恶性肿瘤，其发病率位居全世界消化系统恶性肿瘤第一位，有资料显示，目前我国胃癌发病率及死亡率居恶性肿瘤第二位。由于胃癌早期症状不明显而难被患者察觉，一般有明显症状及就医时都已是中晚期胃癌，因错过了最佳的治疗时间，所以胃癌患者的病死率较高，且生存质量较差。因此胃癌的早期发现、早期诊断，是提高疗效的关键。

MicroRNA(miRNA)是一类内源性的非编码RNA，长约为20个核苷酸左右，miRNA广泛存在于真核生物的细胞内，能通过与3’端或5’端的非翻译区结合方式对DNA进行直接或间接的调控，从而影响细胞的增殖、分化、凋亡等，达到调节生物体生长与发育。miRNAs不仅存在组织及细胞中，同时存在许多体液中，包括血清，血浆，唾液，尿液和羊水。通常把血浆或是血清miRNA认为是循环miRNAs。miRNAs在体液的存在可表示无创癌症生物学标志物。由于失调的miRNA表达的早期事件在肿瘤发生，检测循环miRNA水平也可用于早期癌症诊断和治疗反应的预测以及潜在的新病人选择标准的临床试验中的作用。近年来研究发现胃癌的发生与发展都涉及到多种miRNA的表达异常。Hsa-miR-124-3p是miR-124家族成员之一，有相关研究报道了miR-124与人类胃癌具有一定相关性，其表达水平与胃癌的发展程度呈负相关。

反义链长链非编码RNA是一类染色体位置、序列结构比较特殊的长链非编码RNA，在细胞内广泛存在，并且在以往的研究中已经证实其与肿瘤有着密切的关系，GATA3-AS1是其中一种。GATA3在胃癌中是一种促癌因子，其表达与胃癌的发展程度呈正相关，其反义链lncRNAGATA3-AS1可以通过互补序列结合，从而增强其稳定性，进而促进肿瘤的发生发展。

发明内容

本发明的目的在于提供miR-124-3p及GATA3-AS1基因在制备胃癌检测试剂盒中的应用。本发明的目的还在于提供一种检测胃癌的试剂盒。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明通过研究发现miR-124-3p能与GATA3-AS1竞争性结合，抑制其对下游靶标基因的作用，通过利用血液中miR-124-3p和GATA3-AS1的表达水平可以对胃癌进行诊断。因此，miR-124-3p及GATA3-AS1基因能够用于制备胃癌检测试剂盒。

一种检测胃癌的试剂盒，该试剂盒通过实时荧光定量PCR检测血液中miR-124-3p与GATA3-AS1的表达水平来判断是否患有胃癌。该试剂盒包括扩增miR-124-3p、GATA3-AS1和内参的上下游引物，还可以包括实时荧光定量PCR试剂、逆转录试剂，以及RNA提取试剂。所述的内参优选为U6基因。

优选的，所述的上下游引物分别如下：

miR-124-3p上游引物：GCCGCTAAGGCACGCG，

miR-124-3p下游引物：TATGGTTGTTCACGACTCCTTCAC；

GATA3-AS1上游引物：TAAGGGGCTGGCGATCAAC，