[发明专利]用于检测金黄色葡萄球菌的特异性引物和探针以及实时荧光定量PCR试剂盒在审
| 申请号： | 201810206401.0 | 申请日： | 2018-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN108179210A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 徐红;车团结;陈游;高恺;李亚鹏 | 申请（专利权）人： | 苏州百源基因技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/445 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 | 代理人： | 吕玉博 |
| 地址： | 215163 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 金黄色葡萄球菌 特异性引物 探针 实时荧光定量PCR 试剂盒 检测 实时荧光PCR检测 互补链序列 基因组DNA 高灵敏度 检测技术 上游引物 下游引物 重要意义 准确定量 化脓 活性菌 标本 感染 研究 | ||
1.用于检测金黄色葡萄球菌的特异性引物和探针，其特征在于：所述探针序列为：5’-AAGGATATTGAAAAACGTCCTG-3’；
所述特异性引物为下述序列或为下述序列的互补链序列：
上游引物序列为5’-TGTTAGTACCTTTAGCGTAT-3’；
下游引物序列为5’-AGTTATCTCGCTTGTTATGT-3’。
2.根据权利要求1所述的特异性引物和探针，其特征在于：探针中5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为TAMAR。
3.根据权利要求1所述的特异性引物和探针，其特征在于：所述上游引物和所述下游引物为向5’端和/或3’端方向延伸一至数个碱基或删减一至数个碱基得到的序列。
4.一种用于检测金黄色葡萄球菌的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述实时荧光定量PCR试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的特异性引物和探针。
5.根据权利要求4所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：在20μl PCR反应体系中，所述上游引物的用量为0.2μl，所述下游引物的用量为0.2μl，所述探针的用量为0.2μl。
6.根据权利要求4或5所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述实时荧光定量PCR试剂盒还包括系列浓度标准品和阳性对照；所述系列浓度标准品是将金黄色葡萄球菌femA基因与载体连接，转化至感受态细胞中诱导表达，提取重组质粒，将重组质粒定量后稀释，得到系列浓度标准品。
7.根据权利要求6所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述标准品的核苷酸序列为序列表中序列2。
8.权利要求1-3任一所述的特异性引物和探针、权利要求4-7任一所述的实时荧光定量PCR试剂盒在如下任一中的应用，所述应用不以疾病的诊断和治疗为目的：
(1)定性或定量检测或辅助检测金黄色葡萄球菌；
(2)制备定性或定量检测或辅助检测金黄色葡萄球菌的产品。
9.一种检测或辅助检测待检样品中是否含有金黄色葡萄球菌的方法，该方法不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于：分别以系列浓度标准品和待测样品DNA为模板，利用特异性引物和探针进行实时荧光定量PCR，绘制标准曲线，通过标准曲线和待测样品的Ct值判定结果。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应条件为：94℃预变性2分钟，94℃10秒、60℃30s并收集荧光信号，40个循环。
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