[发明专利]一种菠萝泛菌的PCR检测方法

说明书

本发明公开了一种菠萝泛菌的PCR检测方法，以菠萝泛菌的基因组DNA作为PCR反应模板进行PCR反应；PCR反应体系为：10×PCR Buffer2.5μL；10mM dNTP 1.0μL；10mM上游引物PanITS2‑1F 1.0μL；10mM下游引物PanITS2‑1R 1.0μL；模板DNA 1.0μL；2.5U/mL Taq酶0.5μL；ddH2O 18.0μL；反应条件为：94℃预变性3min，94℃变性30s，50℃退火15s，72℃延伸25S，25个循环。本发明能够快速特异准确的检测到植株材料中的菠萝泛菌，为玉米细菌斑点病的早期诊断、检疫和病害的早期预警提供了一种方法，也可为该菌株在其他环境中的快速检测提供一种方法。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种菠萝泛菌的PCR检测方法。

背景技术

植物病原细菌Pantoea ananatis(Serrano 1928)，属原核生物界 Procaryotae，薄壁菌门Gracilicutes，变形菌纲Gammaproteobacteria，肠杆 菌科Enterobacteriaceae。自1928年首次在菲律宾报道P.ananatis引起菠萝 的果实腐烂以来，已经发现P.ananatis是包括单子叶植物和双子叶植物在内 的很多植物的病原菌，在适宜的环境条件下会引起寄主植物的突发性病害，P. ananatis在自然界的分布很广，它不仅是植物的共生细菌、内生细菌、致病 菌，还在不同的生态小环境(ecological niches)中起不同寻常的作用，例如有报道称它可以作为腐生菌。

已报道P.ananatis至少在11个国家引起10多种植物的病害，造成严重的 经济损失。P.ananatis可以导致总叶面积50％或更多的叶片萎蔫；可以致使洋 葱产量损失达到100％；而被P.ananatis严重侵染的玉米叶片干枯，进而导致 果实的重量和体积严重减少；被P.ananatis感染的桉树死亡或产生多干现象， 很多不同的桉树品种都可以被P.ananatis侵染。P.ananatis还可以导致哈 密瓜、白兰瓜和洋葱收获后果实的腐烂。已知P.ananatis的传播方式有通过 花或昆虫、机械等造成的伤口侵染，以及在大风中植物与植物之间的接触传播。 研究发现洋葱、苏丹草和水稻种子可以携带并传播P.ananatis。另外，P. ananatis引起不同植物感病的严重程度受到环境因素的影响。如果寄主植物 是桉树和玉米，气候温暖(温度在20-25℃)和高湿度条件下发病率高且危害 严重。如果寄主是苏丹草，发病的最适条件为温度32℃和高湿度；寄主为洋葱， 发病的最适条件在温度为28-35℃，高湿度的条件下，洋葱球茎的形成过程中， 可以分离到大量的P.ananatis。

玉米是我国三大粮食作物之一，近年来我国玉米的种植面积稳居第一位。 随着全球气候变化、耕作方式改变和新品种推广，我国玉米病害的发生也有所 改变，一些病原细菌引起的叶斑病有逐年加重发生的趋势，感病品种既涉及普 通玉米，也涉及甜糯玉米。其中，由植物病原细菌菠萝泛菌P.ananatis引起 的玉米细菌性斑点病，在我国的主要玉米产区呈上升趋势，该病可以造成玉米 叶片大面积枯死。玉米细菌性斑点病具有传播快，发病快、难防控的特点，对 玉米生产造成了很大的损失。目前，还没用一种可以直接从植物材料等组织或 环境中，快速特异准确的检测到P.ananatis的方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种菠萝泛菌的PCR检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种菠萝泛菌的PCR检测方法，其特征在于，以菠萝泛菌的基因组DNA 作为PCR反应模板进行PCR反应；PCR反应体系为：10×PCR Buffer 2.5μL； 10mM dNTP 1.0μL；10mM上游引物PanITS2-1F 1.0μL；10mM下游引 物PanITS2-1R 1.0μL；模板DNA 1.0μL；2.5U/mLTaq酶0.5μL； ddH2O 18.0μL；反应条件为：94℃预变性3min，94℃变性30s，50℃退火 15s，72℃延伸25S，25个循环；