[发明专利]一种不结球白菜四倍体育种方法

说明书

本发明公开了一种不结球白菜四倍体育种方法。该方法包括采用组合诱变剂对二倍体不结球白菜子叶柄夹角40°‑60°，第一片真叶未出时的生长点进行处理；所述的组合诱变剂主要由0.1‑0.2％秋水仙素+40‑60μmol·L^‑1甲基胺草磷组成；组合诱变剂处理次数为2‑4次。本发明用低浓度的秋水仙素和APM混合使用获得的四倍体诱变率高达12.6％，不仅提高了诱变率，同时也减少对环境的污染和植株的毒害作用。

技术领域

本发明属于遗传育种领域，涉及一种不结球白菜四倍体育种方法。

背景技术

多倍化是植物进化的趋势之一，化学诱变是多倍体人工诱导普遍采用的方法，秋水仙素是目前最有效的诱变剂，具有干扰微管装配，破坏纺锤体形成和终止细胞分裂的作用^[1]，在遗传上很少发生其他不利的变异^[2]。在秋水仙素诱导不结球白菜加倍的研究中，刘惠吉^[3]首次用 0.4％秋水仙素对不结球白菜生长点处理，成功获得四倍体植株。张振超等^[4]和徐丽娟等^[5]报道用0.2％的秋水仙素处理不结球白菜生长点4次效果最好，四倍体诱变率分别为为8.42％、7.64％。户秋稳等^[6]用2.0g·L^-1秋水仙素处理‘五月慢’二倍体茎尖生长点6次，获得四倍体诱变率为5.90％。

甲基胺草磷(APM)是一种直接干扰植物微管合成的特异性药物，通过提高Ca²⁺在细胞质中的浓度阻止微管聚合，导致染色体分裂多极化和延迟，在较低浓度时，对微管蛋白的解聚能力更强，加倍频率更高，对植物的毒害作用很小。但单独使用APM加倍效果远不如秋水仙素。

近年来研究者开始将秋水仙素、有机溶剂和除草剂类诱变剂进行混合处理，获得了一些效果。李秀兰和安东^[7]用含有0.01％秋水仙素+5mg·L^-1氨磺灵的培养基处理秋石斛种子原球茎 8-10d，四倍体诱变率达90％以上。王凤宝等^[8]用0.05％秋水仙素和2％二甲基亚砜混合水溶液处理豌豆种子48h，诱变率最高为9.5％。张良君等^[9]用1％肥皂水+0.1％吐温80+80μmol·L^-1APM 对单倍体玉米滴心，加倍效果显著。而关于秋水仙素和APM混合诱变剂的研究未见报道，本研究用秋水仙素、吐温20和APM的混合液对不结球白菜‘冬赏味’进行四倍体诱导，以期获得高效低毒的四倍体诱变方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种不结球白菜四倍体育种方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种不结球白菜四倍体育种方法，包括采用组合诱变剂对二倍体不结球白菜子叶柄夹角 40°-60°，第一片真叶未出时的生长点进行处理；处理后，光密度减少至150μmol·m^-2·s^-1，光照时数设为12h·d^-1，昼温定为20℃，夜温15℃，相对湿度定为80％-90％；其中，所述的组合诱变剂主要由0.1-0.2％秋水仙素+40-60μmol·L^-1甲基胺草磷组成；组合诱变剂处理次数为2-4次。

作为所述的不结球白菜四倍体育种方法的优选，组合诱变剂还含有20μl·L^-1吐温20。

作为所述的不结球白菜四倍体育种方法的进一步优选，所述的组合诱变剂组成为0.1％秋水仙素+40μmol·L^-1甲基胺草磷+20μl·L^-1吐温20。

所述的不结球白菜四倍体育种方法的进一步优选，组合诱变剂处理次数为2次：上午 7:30-8:30、下午3:30-4:30各1次。