[发明专利]一种高纯度肝素钠的制备工艺

说明书

本发明提供了一种高纯度肝素钠的制备工艺，主要包括3.0％(w/v)的氯化钠盐解、0.1％～0.2％(w/v)的胰蛋白酶酶解、过氧化氢‑臭氧高效氧化、无水乙醇沉淀、丙酮脱水和真空干燥等步骤，其中过氧化氢‑臭氧高效氧化体系会生成HO₂^‑,是自由基OH·产生的诱发剂，自由基OH·一旦产生，就会引发链式反应，加快氧化速度，提高氧化效果。采用本方案所述的工艺提纯肝素钠与传统的多级过氧化氢氧化处理比起来，节约了至少40％的时间，效价提高了9U/mg，效价回收率提高了8％，制得的肝素钠纯度高，色泽好。

技术领域

本发明涉及肝素钠制备领域，具体涉及一种高纯度肝素钠的制备工艺。

背景技术

肝素钠是临床医学领域实用最广泛的抗凝血药物，它是由D-葡萄糖胺、N-乙酰葡萄糖胺、D-葡糖醛酸以及L-艾杜糖醛酸交替组成的粘多糖硫酸酯，主要存在于动物内脏中的肥大细胞颗粒中，多与蛋白质结合以蛋白质-肝素复合物存在，主要在小肠粘膜和肺脏中含量最高。肝素钠主要用于抗凝血作用，是目前最重要的抗凝血和抗血栓的生化药物之一，但通过肝素钠为原料制备的药剂往往通过注射的方式给药，所以肝素钠必须具备很高纯的度才能保证医疗安全。

目前制备高纯度的肝素钠是在粗品肝素钠的基础上进行提纯的，现有技术通常采用过氧化氢二次氧化去除粗品中的蛋白质和核酸，过程温度高达95摄氏度，PH为1.5～2.0之间，在这样高酸度和高温度的条件下，肝素钠容易失活，导致肝素钠效价损失，而且氧化时间长达20小时以上，生产效率低下，同时过氧化氢用量越大，产品色泽越好，但效价越低。另外，也有现有技术采用絮凝沉淀和滤膜过滤的方法去除粗品中的蛋白质核酸，但是酸性蛋白质沉淀不易滤除，导致滤除时间时常过长，过滤效率低下，因此现有技术采用的是利用硅羟基的玻璃粉或硅藻土作为助滤剂，但效果并不理想，同时助滤剂对肝素钠也具有吸附作用，会造成回收率降低。因此，需要一种高纯度肝素钠制备工艺，用以解决现有技术制备时间周期长，效率低下，肝素钠效价和回收率被降低的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于：一种高纯度肝素钠的制备工艺，用于解决现有技术制备时间长工作效率低，肝素钠效价和回收率降低的技术问题。

本发明采用的技术方案如下：

一种高纯度肝素钠的制备工艺，包括以下步骤：

(1)按照比例将每千克的粗品肝素钠加入到8～10L纯化水中溶解，加入浓度3.0％(w/v)的氯化钠，搅拌45～60分钟过滤，去除析出的杂质沉淀，得到粗品过滤液；

(2)在步骤(1)中得到的粗品过滤液中加入0.1％～0.2％(w/v)的胰蛋白酶，调节PH 值到7.5～8.5，搅拌1.5～2小时，胰蛋白酶将肝素钠中的杂蛋白降解为小分子肽，同时使肝素钠分子从肝素钠-蛋白质的复合物中解离出来，得到酶解液；

(3)将经过步骤(2)得到的酶解液的PH值调节到1.5～2.0，搅拌30～45分钟后，采用高速低温离心去除酶蛋白和蛋白质被降解的小分子肽，得到蛋白含量极少的肝素钠溶液；

(4)在经过步骤(3)得到的肝素钠溶夜中加入1.5％～2.0％(w/v)的过氧化氢，并将 PH值调节至8.5～9.5，搅拌3～4小时，氧化去除肝素钠溶夜中的色素类物质，然后高速低温离心得到肝素钠氧化液；

(5)在经过步骤(4)得到的肝素钠氧化液中加入无水乙醇，将酒精度按照体积百分数调节到55～65度，并在溶液中加入1.0％～1.5％(w/v)的氯化钠，搅拌1～1.5小时过滤，得到肝素钠沉淀物；

(6)在经过步骤(5)得到的肝素钠沉淀物中加入丙酮进行脱水，并通过真空干燥，制得高纯度肝素钠。采用本发明的制备工艺提纯肝素钠时，与传统多级氧化工艺相比，效价提高了9U/mg，效价回收率提高了8％。