[发明专利]一种同时快速测定保健酒中32种游离脂肪酸的方法

说明书

本发明公开了一种使用UPLC‑QTof同时快速测定保健酒中32种游离脂肪酸的方法，待测酒样经前处理后采用配有QTof检测器的超高效合相色谱仪进行检测，获得待测样品的色谱图，对待测样品根据选择离子进行定性分析，然后根据32种游离脂肪酸的标准曲线对待测样品进行定量分析。本发明方法操作简单快捷，准确可靠，重复性好。

技术领域

本发明涉及一种使用UPC2 -QTof同时快速测定保健酒中32种游离脂肪酸的方法，属于检测分析技术领域。

背景技术

游离脂肪酸和构成复合脂质的脂肪酸都在代谢中发挥着一些关键作用——作为主要的代谢燃料(储存和运输能量)、所有细胞膜必不可少的成分和基因调控因子。此外，膳食中的脂质可提供多不饱和脂肪酸，这类脂肪酸是功能强大的局部作用代谢产物(如类花生酸)的前体。常见的动植物来源脂肪酸均为偶数链，每条链含16至24个碳原子，并具有0到6个双键。但是大自然中总有着无数的例外，实际上甚至还存在多达近100个碳原子的奇数碳和偶数碳脂肪酸。此外，双键可以为顺式(Z)和反式(E)构型，也可以具有各种其它结构特征，包括分支点、环、含氧官能团等等。

从生物材料中分离游离脂肪酸(FFA)是一项复杂的工作，必须随时注意防止或尽量减少水解酶的影响。完成分离后，可通过典型的色谱方法对脂肪酸进行分析，目前都是使用气相色谱/质谱法(GC/MS)和液相色谱-串联质谱法(LC/MS/MS)。但是，这些方法都有着各自的不足之处。例如，GC法需要将脂肪酸进行衍生化，以便水解并转化为甲酯，这一过程不仅耗时，而且在衍生化过程中还存在脂肪酸重排的风险，使得无法确定形成的酯是来自FFA还是完整的复合脂质。此外，对于具有高分子量(>C24)的低挥发性极长链脂肪酸来说，即使在脂肪酸甲酯(FAME)衍生化后，其GC/MS分析依然存在问题。在LC/MS方法中，虽然不需要进行样品衍生化，但运行前的样品制备过程费时费力，并且采用的毒性有机溶剂价格昂贵，处理费用也很高。而在典型的反相(RP)LC/MS分析中，则必须将含有所有脂质的有机提取物蒸干，再使用相容性更好的进样溶剂进行复溶。鉴于此，一种简便、快捷、廉价的脂肪酸分离和测定方法迫在眉睫。

发明内容

为了避免上述现有技术所存在的不足之处，本发明旨在提供一种使用UPC2 -QTof同时快速测定保健酒中32种游离脂肪酸的方法。本发明所述32种游离脂肪酸为丁酸、己酸、辛酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、抹香鲸酸、棕榈油酸、10-十七烯酸、γ-亚麻酸、亚麻酸、亚油酸、油酸、反油酸、花生四烯酸、同源γ-亚麻酸、11-14-17-二十碳三烯酸、11-14-二十碳二烯酸、11-二十碳烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳二烯酸、芥酸以及神经酸。本发明方法是一种快速、高通量和高效的FFA分离和分析方法，采用了带有质谱分析的超高效合相色谱(UPC2)，可以为保健酒中游离脂肪酸检测的准确判定、快速检测提供科学依据。

本发明使用UPC2 -QTof同时快速测定保健酒中32种游离脂肪酸的方法，包括如下步骤：

步骤1：前处理

量取20～50mL待测酒样于50mL塑料离心管中，使用氮吹仪去除乙醇，待残留液剩余1～ 2ml时停止氮吹，将去醇后的残留液转移至5mL容量瓶中，用二氯甲烷定容，经0.22μm针式过滤器过滤，获得待测样品；

步骤2：标准曲线的绘制