[发明专利]一种具有还原六价铬的李氏禾内生细菌的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种具有还原六价铬的李氏禾内生细菌的制备方法及应用，该菌株分类命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)Y04，已于2017年06月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号为CGMCC NO.14266。本发明是从铬超积累植物李氏禾的叶片组织中分离筛选出的李氏禾内生细菌，经鉴定为芽孢杆菌，命名为Y04。该菌株可将六价铬还原为三价铬，并明确了还原六价铬的条件，为六价铬污染的微生物修复提供了菌株资源及理论基础。

技术领域

本发明涉及一种可用于环境污染治理的菌株，特别涉及到一种具有还原六价铬的李氏禾内生细菌的制备方法及应用。

背景技术

随着现代化技术的发展，重金属铬在制药、电镀等多领域中得到了广泛的应用。但与此同时，环境中的铬及其化合物的污染问题也越来越严重。长期接触铬及铬化合物容易对胃肠道系统、免疫系统、肝脏和肾脏产生影响甚至诱发呼吸系统癌症。各种铬形态中，主要以铬酸根和重铬酸根形式存在的Cr(VI)被认为是毒性最强的。国际上对铬污染的水体、土壤都提倡采用生物修复法，即借助微生物或植物的絮凝、吸收累积、富集等作用去除重金属离子。从铬重金属污染的环境中分离的白色杆菌属(Leucobacter sp.)、假单胞菌属(pseudomonad)、链霉菌属(Streptomyces griseus.)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.) 和栖热菌属(Thermusscotoductus)都具有较好的Cr(VI)去除能力。

超富集植物具有生物量大、对重金属吸附量是常规植物10～500倍、可在重金属污染土壤中生长良好等优势，在环境污染修复中的应用日益广泛。与此同时，超富集植物内生菌的研究也开始受到研究者的重视，如As超富集植物蜈蚣草、Zn超富集植物东南景天、Cd超累积植物龙葵、Mn超积累植物商陆等均有研究报道。李氏禾(Leersia hexandra Swartz)是张学洪等在广西桂林发现的铬超积累植物，也是第一种在中国境内被发现的铬超积累植物，研究表明其对 Cr(III)和Cr(VI)都有较强的富集能力。但目前利用李氏禾内生细菌对重金属 Cr(VI)进行还原的研究尚未见报道。本发明以李氏禾为原材料，为六价铬污染微生物修复提供了新的微生物资源。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种具有还原六价铬的李氏禾内生细菌的制备方法及应用，该菌株具有将六价铬还原为三价铬的功能。

本发明所采用的技术方案是一种具有还原六价铬的李氏禾内生细菌的制备方法，具体步骤为：

(1)采集李氏禾植物，选取适量健康无病害李氏禾叶片，蒸馏水冲洗干净；

(2)将步骤(1)所得李氏禾的叶片在无菌条件下用70％的酒精浸泡20s， 2.5％次氯酸钠溶液浸泡1min，然后用无菌水冲洗6次；

(3)挑取步骤(2)所得的适量的叶组织，研磨，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，在37℃，120r/min条件下振荡培养2d；

(4)将步骤(3)所得物稀释后涂布于含Cr(Ⅵ)浓度为200mg/L的牛肉膏蛋白胨固体培养基，37℃培养2d，挑取长势较好的菌落，经反复划线获得纯菌株；

所述的李氏禾内生细菌，分类命名：芽孢杆菌(Bacillus sp.)Y04，该菌株已于2017年06月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.14266，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

所述的具有还原六价铬的李氏禾内生细菌的制备方法，其特征在于，步骤 (1)中所使用的植物为桂林理工大学环境科学与工程学院实验室的铬超积累植物李氏禾的叶部组织；