[发明专利]一种多重液相芯片检测方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种多重液相芯片检测方法及试剂盒，以HSV‑1病毒培养物及BV gD、SIV p27、SRV p27、HTLV‑1envelope重组蛋白分别作为BV、SIV、SRV、STLV的抗原进行不同编号磁珠的包被，以包被了不同抗原的磁珠为载体，在BV、SIV、SRV和STLV抗体单一液相芯片检测方法的基础上，建立同时检测猴BV和其他三种逆转录病毒共4种抗体的多重液相芯片检测方法，为BV、SIV、SRV和STLV抗体监测提供一种快速、有效、高通量的检测方法。

技术领域

本发明涉及实验动物病毒病检测领域，更具体地说，涉及一种快速、准确、高通量检测猴疱疹病毒、猴免疫缺陷病毒、猴D型逆转录病毒和猴嗜T淋巴细胞白血病病毒的多重液相芯片检测方法及试剂盒。

背景技术

非人灵长类动物因其与人类相似的生理生化、免疫、遗传等特征，俨然成为探索、解决人类健康和疾病问题的理想动物模型。随着国际市场对实验猴需求量的增加，对实验猴的质量也提出了更为严格的要求，实验猴从普通级向无特定病原体级(specificpathogen free,SPF)发展是必然趋势。国际上对SPF级猴的定义主要指体内不含猴疱疹病毒、猴免疫缺陷病毒、猴逆转录病毒、猴嗜T淋巴细胞白血病病毒等特定病毒的猴。另外，美国Charles River Laboratories(CRL)曾提出了获得全球众多实验动物使用者认可的无病毒抗体(virus antibody free，VAF)的概念，该标准满足实验动物繁育的要求也符合科研使用的实际需要。

BV(Monkey B virus,Cercopithecine herpesvirus 1)在分类上属疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科纯疱疹病毒属。猴是B病毒的自然宿主，感染率可达10～60％，多数情况下呈良性经过，但人类感染主要表现为脑脊髓炎症状，常导致病人死亡。迄今为止，猴B病毒的基因组序列并未完全测序，但已获得的序列与HSV的序列有较高的同源性。感染动物研究发现，猴病毒感染后，囊膜糖蛋白gB、gC和gD的抗体出现时间最早(感染后7d产生)、滴度最高，在体内维持时间也最长(2年以上)，表明囊膜蛋白具有较好的免疫原性和反应原性，是病毒诊断和防治研究的主要靶点。Perelygina等人表达了从猴B病毒gD表位库中筛选出的一个免疫优势表位(gD362-370)，该表位位于猴B病毒的C端，高度保守，不存在于HSV-1或HSV-2中，在临床猴B病毒血清的检测中表明95％的阳性血清能够和该表位反应，而HSV-1和HSV-2抗血清并不与该表位反应，故研究中选取HSV-1病毒培养物及gD重组蛋白作为B病毒单一液相芯片检测技术的抗原进行微球包被。

SIV(simian immunodeficiency virus)属逆转录病毒科慢病毒属，是RNA病毒，猴艾滋病(AIDS)的致病因子之一。其在天然宿主中不致病，只有跨种族感染才会出现类似人AIDS的免疫缺陷症状。衣壳蛋白p27构成SIV病毒粒子双层壳的内壳，其氨基酸序列较为保守，含有诱导机体体液免疫和细胞免疫的主要抗原决定簇，而且同属病毒的衣壳蛋白具有相同或相似的抗原性，即具有群抗原牲，因此被认为是SIV抗原检测的标志物。

SRV(Simian type D retrovirus)属于逆转录病毒科正逆转录病毒亚科β逆转录病毒属，是单链RNA病毒，猴艾滋病(AIDS)的又一致病因子。其可分为内源性病毒(SERV)和外源性病毒(SRV)，比较SERV与SRV核酸序列的进化，表明SERV是SRV的祖先。目前已发现SRV有7个血清型，SRV-1、3、5主要流行在亚洲和印度恒河猴中，SRV-2主要流行在东南亚食蟹猴和豚尾猴中，SRV-4很少流行，主要从日本食蟹猴分离到，SRV-6从印度长尾叶猴分离到，SRV-7从野生印度恒河猴分离到。其中，SRV-1～3已测序完成，核衣壳蛋白p27的氨基酸序列高度保守。