[发明专利]一种用于培养布氏白僵菌的培养基及其培养方法

说明书

本发明公开了一种布氏白僵菌培养基及培养方法，该培养基提高布氏白僵菌产孢量及其对昆虫的毒力，所述培养基的组分及组分含量如下：花生壳+米粉+麦麸+土元蜕，质量比为：1～5∶0.5～1.5∶2～6∶1～3；培养方法包括：1)布氏白僵菌固相发酵培养基种子液的制备，2)固相发酵培养，及3)接种与培养；本发明所采用的培养基，可降低培养成本，又能增加孢子产量，缩短生产周期，且能够提高孢子对昆虫的毒力。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，具体是指一种用于培养布氏白僵菌的培 养基及其培养方法。

背景技术

布氏白僵菌又名卵胞白僵菌，是一种重要的昆虫病原真菌，能够寄生7 目70多种昆虫。多年来，我国用布氏白僵菌防治农林重要昆虫如马尾松松毛 虫、象甲、天牛等，已获得较好的技术效果。有研究表明，在田间每平方米土 壤以10¹⁰孢子处理，能造成次年害虫流行病，而且真菌在虫尸和土壤中的宿存 保证了对下一代害虫的侵染，从而维持其在田间的特效性，因而布氏白僵杀虫 剂是目前防治地下害虫、发展无公害生产的首选生物药剂，在防治林业害虫方 面，布氏白僵菌粉剂，已被大面积推广使用。真菌的大量培养生产是满足田间 应用的前提，但迄今仍无成熟的白僵菌杀虫剂产品，也缺乏高技术的工业化生 产。

基于此，研究并设计了一种利于提高布氏白僵菌产孢量及毒力的培养基及 培养方法。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种利于提高布氏白僵菌产孢量及毒力的培养基 及培养方法，该培养基为布氏白僵菌菌株的生长和分生孢子的生产提供了良 好的营养和空间环境。

本发明通过下述技术方案实现：一株布氏白僵菌(Beauveria brongniartii)HFBbr001，2017年9月8日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号CGMCC No.14157。

一种用于培养布氏白僵菌的培养基，其特征在于，所述培养基的组分及组 分含量如下：米粉+土元蜕+花生壳+麦麸，质量比为：1～5∶0.5～1.5∶2～6∶1～3。

进一步地，所述培养基的组分及组分含量如下：米粉+土元蜕+花生壳+麦 麸，质量比为：3∶1.5∶4∶3。

更进一步地，所述培养基的组分及组分含量如下：米粉+土元蜕+花生壳+ 麦麸，质量比为：3∶1∶4∶2。

本发明还提供了一种用于培养布氏白僵菌的培养基的培养方法，其特征在 于：包括如下步骤：1)布氏白僵菌固相发酵培养基种子液的制备

采用SDY+2％麦芽糖培养基制备布氏白僵菌固相发酵培养基种子液；方 法为在超净工作台上用无菌接菌针将活化后的布氏白僵菌孢子均匀接种于 500mL锥形瓶中含SDY+2％麦芽糖培养基液体培养基中，置于恒温摇床内， 条件为温度25±1℃，170rpm培养96h，待培养基变为粘稠状和锥形瓶瓶壁出 现白色黏状物，即为获得布氏白僵菌固相发酵培养基种子液。

2)固相发酵培养

用电子天平称取每处理固体培养基基本组分中花生壳、虫蜕、米粉、麦麸 和麦芽糖质量，先将米粉溶于水制成均匀米粉溶液，然后将虫蜕和麦麸先后溶 于米粉水溶液，再将其与用水浸泡后的花生壳混合，使其制成的溶液恰好在花 生壳表面均匀分布，并置于直径等于40cm铁盆中，同时用纱布封口，然后放 在灭菌锅中121℃高压灭菌20min。

3)接种与培养

将种子培养液分别均匀接种于各处理固相培养基中，接种量为固相培养基 质量的10％菌悬液；培养基置于灭过菌的有网眼的不锈钢托盘中并置于恒温恒 湿光照智能霉菌培养箱中固相发酵，培养基初始含水率为80±5％，25±1℃、 95％RH条件下培养10d，前3d无光黑暗处理，从第4d开始在光照强度 3000LX和光周期10:14h光照:黑暗条件下培养至第10d。