[发明专利]结核分枝杆菌PKA蛋白及其融合蛋白在辅助诊断肺结核病中的应用

说明书

本发明公开了结核分枝杆菌PKA蛋白及其融合蛋白在辅助诊断肺结核病中的应用。本发明提供一种结核分枝杆菌蛋白质PKA及其与ESAT6融合表达而来的融合蛋白。本发明的实验证明，本发明获得的PKA蛋白和融合蛋白可以激活机体宿主细胞产生结核分枝杆菌抗原特异性IFN‑γ，候选为辅助诊断肺结核病的抗原，为提高肺结核病诊断的敏感性和特异性及开发新型诊断试剂盒提供新的思路。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及活动性肺结核病(含菌阳、菌阴性肺结核病)患者的辅助诊断；尤其涉及一种结核分枝杆菌PKA蛋白及其融合蛋白在辅助诊断肺结核病的应用。

背景技术

WHO发布的《2016年全球结核病报告》估算2015年全球新发结核病患者达1040万，约有180万人死于结核病。大量结核分枝杆菌潜伏感染者的存在也会导致未来结核病的发病率和患病率居于较高水平。近年来，由于流动人口的剧增、耐药结核分枝杆菌(DR-MTB)的出现及流行，以及人类免疫缺陷病毒(HIV)共感染，导致活动性结核病的发病率和死亡率大幅度上升,至今仍是一个不容忽视的世界性公共卫生难题。我国是结核病高负担国家之一,结核病的疫情严重，位居世界第二。在我国，结核病防控目前仍然面临以下问题：痰菌阳性结核病诊断方法敏感性和特异性低，临床诊断结核病病人中仅50％左右有病原学证据(痰涂片、痰培养和PCR检测)；而临床诊断结核病患者中占较大比例的痰菌阴性结核病(～50％)缺乏特异且敏感的诊断技术和方法，目前菌阴结核病的临床诊断仅靠X光检测或者实验性治疗，造成了临床误诊或者贻误患者合理治疗；耐药结核病诊断时间过长，耐多药结核病患者的负担越来越高；结核/非结核分枝杆菌混合感染鉴别诊断漏检率高；无法区别不同感染时期、无法早期诊断合并感染、无法客观地监测结核病疗效；缺乏有效保护成人结核病的预防性疫苗以及针对潜伏感染重点人群的干预治疗策略与措施等。其中，缺乏早期、快速的诊断技术和方法，缺乏菌阴结核病的诊断方法很大程度上导致了结核病患者的漏诊和社会播散、直接或间接增加了结核病的发病率和死亡率。从目前研究现状看，新疫苗和新药研制在短期内突破的可能性非常小。因此，如何尽快解决结核病诊断问题、早期诊断和治疗患者及研发新型疫苗是国际上的研究热点，是有效控制结核病发病率和死亡率最强有力的保证。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种结核分枝杆菌蛋白质。

本发明提供的蛋白质，为如下a)-e)中任一种蛋白质：

a)氨基酸序列包括序列表中序列1所示的氨基酸序列的蛋白质；

b)氨基酸序列由序列表中序列1所示的氨基酸残基组成；

c)将a)或b)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

d)与a)或b)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；

e)a)-d)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

编码上述蛋白的核酸分子也是本发明保护的范围。

上述核酸分子为如下1)-4)中任一种所示的核酸分子：

1)其编码序列包括序列表中序列3；

2)其编码序列为序列表中序列3；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1所述蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA分子具有80％以上或90％以上的同源性且编码权利要求1所述蛋白的DNA分子。

本发明另一个目的是提供一种融合蛋白，包括上述蛋白和ESAT6蛋白。

上述融合蛋白为如下1)-5)中任一种蛋白质：