[发明专利]检测环状RNA hsa_circ_0006148的引物、试剂盒和检测方法及其应用

说明书

本发明涉及检测环状RNAhsa_circ_0006148的引物、试剂盒和检测方法及其应用，包括检测环状RNA hsa_circ_0006148的引物，试剂盒包括外周血样本的RNA提取试剂、所述的引物、去基因组DNA反应体系、逆转录反应体系、qPCR操作反应体系，本发明公开了环状RNA hsa_circ_0006148在胃癌患者及正常人外周血中的表达情况，并用荧光定量PCR检测环状RNA hsa_circ_0006148。环状RNA hsa_circ_0006148可用于胃癌的早期诊断，疾病进展，预后情况，并可评价癌症的治疗效果。

技术领域

本发明是用荧光定量PCR方法检测胃癌患者外周血中环状RNA hsa_circ_0006148的异常表达及意义，属于分子诊断技术领域，涉及检测环状RNA hsa_circ_0006148的引物、试剂盒和检测方法及其在胃癌患者在早期诊断、治疗效果评价和预后判断中的应用。

技术背景

胃癌在我国发病率和死亡率均很高。据《中国肿瘤登记年报》报道，全国胃癌发病率为36.21/10万，居恶性肿瘤第二位；其死亡率为25.88/10万，居恶性肿瘤第三位。晚期胃癌患者五年生存率不到10％[1]，肿瘤的复发和转移是其致死的主要原因。因此，胃癌的早期诊断及控制转移发生对患者预后至关重要。然而，临床上常用的传统的血清胃癌标志物(CEA、CA125、CA72-4、 CA199)的敏感性和特异性均较低。发现新的调控胃癌细胞转移的肿瘤相关基因，不但有助于深入了解肿瘤发生发展的分子机制，补充和完善现有的细胞癌变理论体系，而且有助于鉴定新的胃癌特异的生物标志物和药物靶点，为胃癌的防、诊、治提供重要的理论依据。

circRNA是一类最新发现的环状单链非编码RNA，在真核生物和人的所有组织中均有表达，且稳定性较好，其主要作用是充当miRNA海绵或RNA结合蛋白(RNA bindingproteins，RBPs) 海绵，进而调控基因表达。circRNA来源于内含子或外显子，可以充当微小RNA海绵，还能与蛋白质相结合，从而参与基因表达调控并影响蛋白质的功能。一些circRNA含有miRNA的结合位点，可以调控miRNA的生物学功能，从而间接参与癌症的发生和发展过程。在非编码RNA的调控网络中，circRNA和miRNA的结合与竞争关系为我们理解癌症发生和发展过程提供了新思路。

在寻找肿瘤诊断标志物方面，因采集体液(唾液、外周血等) 创伤小、易于获得等特点，一直是研究者们最理想的选择。然而，目前尚无circRNA检测试剂应用于胃癌等肿瘤患者外周血检测。因此，开拓建立circRNA的引物、试剂盒和检测方法，应用于胃肿瘤监测，在探索胃癌新型诊断标志物的领域具有重要意义。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供一种检测环状RNA hsa_circ_0006148的引物、试剂盒和检测方法及其应用，公开了环状RNA hsa_circ_0006148在胃癌患者及正常人外周血外周血中的表达情况，包括荧光定量PCR检测环状RNA hsa_circ_0006148的引物、试剂盒和检测方法，以及该引物或试剂盒在胃癌中的应用。环状RNA hsa_circ_0006148可用于胃癌患者的早期诊断、治疗效果评价和预后判断。