[发明专利]HFn包载铂类药物的方法及其产物

说明书

本发明涉及HFn包载铂类药物的方法及其产物。具体而言，本发明通过具体探索不同浓度的脲或盐酸胍、不同的HFn/铂类药物如DDP、CBP比例和/或不同的孵育条件对HFn包载铂类药物如DDP、CBP的最佳条件进行了探索。利用本发明所获得的包载条件，可以方便、快捷、高效、足量地利用HFn包载铂类药物如DDP、CBP。

技术领域

本发明涉及HFn(人H铁蛋白，即由人铁蛋白的H亚基自组装形成的铁蛋白)包载铂类药物如DDP(顺氯氨铂)、CBP(卡铂)的方法及其产物。具体而言，本发明涉及利用脲或盐酸胍解聚、复性HFn并包载铂类药物如DDP、CBP的方法及产物。

背景技术

铁蛋白(ferritin)是参与和维持铁代谢平衡的重要功能蛋白，它是一类广泛存在于动植物及微生物细胞中含高铁量的蛋白质。从细菌到人类，尽管不同生物的铁蛋白氨基酸序列具有极大的差别，但其结构相似。典型的铁蛋白结构是由蛋白外壳和铁内核两部分构成，其中蛋白外壳是由24个亚基自组装形成的笼状结构(外径12nm，内径8nm)，铁内核的主要成分为水铁矿(5Fe₂O₃·9H₂O)。铁蛋白外壳通常是由两种蛋白亚基(H和L)组成。在机体不同组织和器官中，铁蛋白分子中含有H和L亚基的比例有所不同。

人H铁蛋白(HFn)是指由人铁蛋的H亚基自组装形成的铁蛋白。由人铁蛋白的H亚基可以自组装形成笼状蛋白，所包含的人铁蛋白的H亚基数目通常为24。人H铁蛋白的全长氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

MTTASTSQVRQNYHQDSEAAINRQINLELYASYVYLSMSYYFDRDDVALKNFAKYFLHQSHEEREHAEKLMKLQNQRGGRIFLQDIKKPDCDDWESGLNAMECALHLEKNVNQSLLELHKLATDKNDPHLCDFIETHYLNEQVKAIKELGDHVTNLRKMGAPESGLAEYLFDKHTLGDSDNES(SEQ ID No.1)

根据文献报道，不同来源铁蛋白的药物装载，主要依赖于两种方式：1、药物在特定处理条件下，通过铁蛋白上的离子通道或疏水通道，进入蛋白壳内部；2、利用低pH值或高浓度脲，使蛋白壳发生解聚，在随后的复聚过程中加入待包载药物，进而实现药物在蛋白壳内部的装载。上述的包载方法中，尤其以高浓度脲条件下的HFn包载阿霉素效率最高，达到每分子HFn装载33分子阿霉素；该方法的简要步骤为：将人HFn加入终浓度大于6M的脲中，室温下反应30分钟，随后加入适量阿霉素试剂，并避光反应10分钟，然后使用透析的方法，将反应体系中的脲浓度逐级递减至0，从而实现阿霉素在HFn中的包载。相比其他包载方法，虽然高浓度脲法有效地提高了阿霉素在HFn中的装载量，但是距离临床用药需求仍有较大的差距，按照1分子铁蛋白装载33分子的阿霉素计算，临床单次给药所需的蛋白质量就达到了克级水平，显著超出了现有蛋白质药物的最高给药剂量(百毫克级)。为了满足临床用药需求，本领域必须开发载药量更大的HFn药物包载方法。

以顺铂为代表的铂类抗癌药物是当今临床恶性肿瘤化疗的基石，也是肿瘤内科发展的基础之一，据统计，以顺铂为主或含有顺铂的化疗方案占所有化疗方案的70～80％，主要包括顺铂类药物如顺铂、卡铂类药物如卡铂、奈达铂、奥沙利铂。

DDP，即顺氯氨铂，又称顺铂，顺式铂，顺式二氨二氯铂，化学名称为顺式二氨基二氯络铂，为橙黄色或黄色结晶性粉末，是目前常用的金属铂类络合物，在分子中铂原子对其抗肿瘤作用有重要意义。但只有顺式才有意义，反式无效。DDP微溶于水，易溶于二甲基甲酰胺，在水溶液中可逐渐转化成反式和水解。该品能与DNA结合，引起交叉联结，从而破坏DNA的功能，并抑制细胞有丝分裂，高浓度时也抑制RNA及蛋白质的合成，为一种细胞非特异性药物。是癌症治疗的常用化学药物，抗瘤谱较广，临床用于治疗睾丸恶肿肿瘤，对胚胎瘤和精原细胞瘤均有较好效果，与常用药物无交叉耐药。对卵巢癌、乳腺癌和膀胱癌有较好疗效。对头颈部癌、肺癌、食管癌、恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤软组织肉瘤和癌性胸腹水等也有一定疗效。与其他抗癌药联合应用效果更好。