[发明专利]一种双特异性抗体及其应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种双特异性抗体。本发明公开一种VEGFR2抗体，还提供了一种双特异性抗体，其包括VEGFR2抗体、连接肽和CD16A抗体，所述VEGFR2抗体、所述连接肽和所述CD16A抗体顺次连接。本发明公开的VEGFR2抗体和CD16A抗体连接的双特异性抗体，能特异性地与靶细胞或肿瘤细胞结合，还能激活NK细胞发生抗体依赖性细胞毒性ADCC反应，同时VEGFR2抗体还能抑制肿瘤的生长和转移。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种双特异性抗体及其应用。

背景技术

CAR-T，全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，是目前较为有效的恶性肿瘤的治疗方式之一。嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。第一代CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段)，一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。第二代是双特异性T细胞衔接器(Bispeific T cell Engager，BiTE)：又称为串联单链抗体，是由两个单链抗体通过一个灵活的连接肽(linker)如甘氨酸、丝氨酸等重复基序连接而成的串联结构，一般通过基因工程技术直接产生全人源的BiTE抗体。该双特异抗体就可在T细胞内表达分泌，一端是特异性识别肿瘤抗原的ScFv，另一端为特异性活化T细胞的ScFv，不仅可以使回输进体内的T淋巴细胞发挥特异性的抗肿瘤效应，而且还可以活化体内其他T淋巴细胞发挥抗肿瘤效应。

目前，CAR-T技术存在两个缺陷，一是CAR-T技术不能介导体内大量常驻NK细胞靶向肿瘤；二是，BiTE技术中BsAb在体内不能自我扩增、半衰期短、在体内无有效分布。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种双特异性抗体及其应用，能有效解决目前CAR-T技术不能介导体内大量常驻NK细胞靶向肿瘤以及BsAb在体内不能自我扩增、半衰期短和无有效的体内分布的技术缺陷。

本发明公开一种VEGFR2抗体，其具有重链可变区和轻链可变区：

(1)所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸；或者与(1)所示的氨基酸序列至少有90％同源性的且功能相同或相似的氨基酸序列；

(2)所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或者经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸；或者与(2)所示的氨基酸序列至少有90％同源性的且功能相同或相似的氨基酸序列。

作为优选，所述多个为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个或36个。

更为优选，抗体还包括恒定区，所述的恒定区为人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的任意一种。

进一步的，本发明还公开了一种VEGFR2抗体的表达载体，包括编码SEQID No.1和SEQ ID No.2的核苷酸。

进一步的，本发明还公开了一种VEGFR2抗体的宿主细胞，所述的宿主细胞经由所述的表达载体转化或转染而来，为原核细胞或真核细胞。

进一步的，本发明还公开了一种VEGFR2抗体的结合物，包含与化学标记或生物标记共价连接的所述的抗VEGFR2抗体。

进一步的，本发明还公开了一种偶联物，其由所述的抗VEGFR2抗体和/或所述的结合物与固体介质或半固体介质偶联形成。